高压酶解法提取硫酸皮肤素工艺优化及其抗氧化活性分析

以猪肠粘膜提取肝素过程中透过液为原料,优化硫酸皮肤素提取工艺,探讨硫酸皮肤素的抗氧化能力。以硫酸皮肤素浓度为检测指标,筛选酶解最佳用酶,在单因素基础上通过Box-Behnken响应曲面试验优化高压酶解工艺,筛选最优大孔树脂,优化动态吸附洗脱条件纯化硫酸皮肤素,探究体外抗氧化活性。结果显示:在最佳酶解条件温度56 ℃,pH9.0,时间8.4 h,压力135 MPa下实测酶解硫酸皮肤素浓度为13.05 ng/mL,接近模型值;D312树脂以1.5 BV/h流速上样,4% NaOH 1.5 BV/h流速洗脱纯化效果最好,高效凝胶渗透色谱测定纯度达73.32%;硫酸皮肤素抗氧化能力与浓度呈正相关,DPPH自由基在2.4 mg/mL时清除率为36.29%,表现出一定清除能力,对于·OH 2.4 mg/mL时清除能力较强为68.2%,总还原力于2.4 mg/mL时为0.22。该研究为分离纯化硫酸皮肤素及其在抗氧化功能方面开发利用提供理论依据。     

猪小肠粘膜碱性磷酸酶的分离纯化及性质研究

猪小肠粘膜经过Tris-HCl缓冲液(pH8.5)充分溶解、正丁醇除脂、冷冻离心、真空冻干等步骤处理后,先后经过Phenyl High Performance疏水层析/DEAE Fast Flow 阴离子层析/Sephacryl S-200凝胶层析纯化后得到猪小肠粘膜ALP(碱性磷酸酶),并对其蛋白二级结构及理化性质进行研究。结果表明:该酶经过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离得到ALP蛋白带,分子量约为57.0 kDa。该酶纯化倍数为68.2,比活力倍数为19.1 U/mg。利用圆二色性光谱测定纯化后蛋白二级结构,发现α-螺旋3.6%、β-折叠41.8%、β-转角21.5%、无规则卷曲33.1%。ALP在催化底物对硝基苯磷酸二钠(p-NPP)作用下最佳温度30 ℃、最佳pH为9.5;金属离子对ALP起到激活的离子为Mg²⁺和Ca²⁺,起到抑制的离子为Zn²⁺和EDTA。     

纳豆冻干粉对2型糖尿病碱性磷酸酶与炎症反应的影响

为探究纳豆冻干粉对2型糖尿病碱性磷酸酶、细菌内毒素和肠道中炎性因子的影响,采用高糖高脂饮食+链脲佐菌素腹腔注射建立2型糖尿病模型,连续给予大鼠灌胃纳豆冻干粉水溶液(4、8 g/kg),测定大鼠体质量及血糖变化、粪便中肠道碱性磷酸酶(intestinal alkaline phosphatase,IAP)的活力及脂多糖(...     

超高压处理对冰淇淋浆料及其成品品质的影响

该研究主要探究超高压（ultra-high pressure,UHP）处理对分别以卡拉胶、黄原胶和塔拉胶为稳定剂制得的冰淇淋浆料及其成品品质的影响。以稳定剂添加量0.15%,分别经50、100、150、200 MPa处理60 min为处理组,以老化处理（2℃下静置24 h）为对照组,测定冰淇淋浆料的乳化性、乳化稳定性、混料粘度、粒径,分析荧光强度分布趋势,测定冰淇淋成品的硬度、膨胀率和融化率。结果表明,浆料经超高压处理后,其乳化性呈先升高后降低的趋势,当压力为150 MPa时乳化稳定性最高;内源荧光光谱扫描结果显示浆料中酪蛋白分子发生去折叠现象;该条件下以卡拉胶为稳定剂制得的冰淇淋成品的硬度、膨胀率和融化率最好。由此可知,由卡拉胶为稳定剂制得冰淇淋浆料在150 MPa处理后能在一定程度上改善冰淇淋的成品品质。     

汉麻提取物生物学功能及汉麻在动物营养上的应用

本研究以汉麻分离蛋白（Hemp Protein Isolate,HPI）为原料,通过超高压辅助酶解反应对HPI进行改性,测定不同压力下汉麻蛋白酶解产物（hydrolysate of hemp protein isolate,HPIH）的聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE）电泳特性、表面疏水性、巯基含量、傅立叶红外光谱和内源荧光光谱分析改性前后汉麻分离蛋白的结构变化。结果表明,超高压（ultra-high pressure,UHP）（0.1、100、200、300 MPa）处理对HPI酶解反应具有一定的辅助作用,且随压力的升高酶解反应程度逐渐增大,分子量逐渐降低;HPI经改性后,疏水性基团逐渐暴露,表面疏水性随压力的增大先上升后下降,且变化差异性显著（P<0.05）,在200 MPa时表面疏水性达到最大;酶解反应后,HPIH游离巯基含量显著降低（P<0.05）,而表面巯基含量随压力增大呈先上升后下降的趋势;通过测定改性前后蛋白质氨基酸组成及含量可知,改性前后HPI氨基酸组成不变,但各氨基酸含量存在不同程度下降;由傅立叶红外光谱图可以看出,与HPI相比,HPIH的吸收峰强度、峰型及峰面积等均发生不同程度变化,说明超高压辅助酶解反应使蛋白质二级结构发生改变;内源荧光光谱显示,HPIH荧光强度增大且最大发射波长发生红移,说明酶解反应改变了HPI的三级结构;抗氧化活性结果表明,适当的压力处理可有效提升酶解产物的抗氧化能力,当压力为200 MPa时,HPIH的DPPH、ABTS⁺自由基清除能力及还原能力达到最高。综上所述,超高压辅助酶解改性处理能显著改变汉麻分离蛋白的二、三级结构,暴露出疏水基团等活性基团,从而提高其抗氧化性。

     

阿拉伯半乳聚糖对2型糖尿病大鼠肠道碱性磷酸酶、细菌内毒素和肠道中细胞因子的影响

本实验以低剂量腹腔注射链脲佐菌素（30 mg/kg）建立糖尿病大鼠模型,建模成功后,连续给予大鼠灌胃阿拉伯半乳聚糖（Arabinogalactan, AG）水溶液（100 mg/kg、500 mg/kg）,测定大鼠体质量及血糖变化、粪便中肠道碱性磷酸酶（IAP）的活力及细菌内毒素中脂多糖（LPS）的浓度变化,并通过MSD多因子方法检测肠道中细胞因子浓度的变化。结果表明,与模型组大鼠相比,AG剂量组空腹血糖浓度显著降低（P<0.05）,IAP活力显著增加（P<0.05）,LPS浓度显著降低（P<0.05）,且肠道中促炎因子白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-1（IL-1β）、生长调节致癌基因α（KC/GRO）的浓度显著减少（P<0.05）,而抗炎因子白介素-4（IL-4）、白介素-5（IL-5）、白介素-10（IL-10）、白介素-13（IL-13）的浓度显著增加（P<0.05）。因此,可以证明AG能够提高IAP活力,降低LPS浓度,调控大鼠细胞因子,进而对2型糖尿病大鼠模型在免疫方面具有一定改善作用。     

黄芪对2型糖尿病大鼠碱性磷酸酶与炎症反应的影响

目的:探究黄芪对2型糖尿病大鼠碱性磷酸酶、细菌内毒素和血清中炎症因子的影响。方法:采用高糖高脂饮食+链脲佐菌素腹腔注射建立2型糖尿病模型,连续给予大鼠灌胃黄芪水溶液（0.25、0.5 g/kg）,测定大鼠体质量及血糖变化、粪便中肠道碱性磷酸酶（IAP）的活力及细菌内毒素（LPS）的浓度变化并用MSD多因子方法检测血清中炎症因子（白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-1（IL-1β）、白介素-4（IL-4）、白介素-5（IL-5）、白介素-10（IL-10）、白介素-13（IL-13）、生长调节致癌基因α（KC/GRO））浓度变化的分析。结果:与模型组相比,黄芪剂量组空腹血糖浓度显著降低（P<0.05）,IAP活力显著增加（P<0.05）,LPS浓度显著降低（P<0.05）,且血清中促炎因子IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-1β的浓度显著减少（P<0.05）,而抗炎因子IL-4、IL-5、IL-10、IL-13的浓度显著增加（P<0.05）,趋化因子KC/GRO的浓度显著下降（P<0.05）。结论:黄芪可以促进肠碱性磷酸酶活性,并能够有效调节T2DM小鼠血糖及炎症反应。     

火麻仁油及大麻二酚对抑郁模型小鼠行为及炎症反应的影响

目的:探究火麻仁油及大麻二酚（Cannabidiol,CBD）对慢性不可预测的轻度应激（Chronic unpredictable mild stress,CUMS）模型小鼠行为学及炎症因子的影响。方法:将50只雄性C57BL/6小鼠随机分成5组:空白组、模型组、火麻仁油组（3 mL/kg）、CBD低剂量组（15 mg/kg）、CBD高剂量组（30 mg/kg）,试验周期8周,测定小鼠抑郁、焦虑、学习认知能力及炎症因子（肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1β）和诱导NOS（iNos））的mRNA表达及小胶质细胞的离子化的钙结合衔接分子1（IBA-1）的蛋白表达。结果:与空白组相比,模型组在抑郁和焦虑行为及学习和认知功能有显著差异（P<0.05; P <0.01）;与模型组相比,CBD剂量组均显著改善模型小鼠的抑郁焦虑行为并提高了学习认知功能（P<0.05; P<0.01),火麻仁油组显著改善小鼠的蔗糖偏好指数和新物体识别能力（P<0.05）。与空白组相比,模型组小鼠的皮层和海马组织中TNF-α、IL-1β和iNos mRNA表达量显著升高（P<0.05; P<0.01）;与模型组相比,CBD剂量组的皮层和海马TNF-α、IL-1β和iNos mRNA表达量均显著降低（P<0.05; P<0.01）;火麻仁油组皮层、海马TNF-α和iNos无显著性差异（P>0.05)。免疫组化结果显示,火麻仁油和CBD均抑制炎症介质小胶质细胞的离子化的钙结合衔接分子1（IBA-1）的表达。结论:CUMS小鼠建模成功,火麻仁油能够提高小鼠的抑郁行为及认知能力,并且降低IL-1β表达,CBD可改善小鼠的焦虑症状、提升学习和认知功能,抑制脑组织皮层和海马的炎症反应,从而证明火麻仁油和CBD对CUMS模型小鼠具有一定的作用。     

汉麻叶中大麻二酚的分离纯化及抗抑郁功能研究

目的：采用柱层析技术对汉麻叶中大麻二酚（Cannabidiol，CBD）进行分离纯化，并对其在抑郁症状方面进行应用探究。方法：汉麻叶经预处理后，通过超临界CO2萃取获得汉麻浸膏，树脂进行两步纯化获得CBD纯品。建立慢性不可预测的轻度应激模型小鼠，通过灌胃CBD来探究其抑郁行为及炎症因子的影响。结果：通过此方法进行分离纯化提取CBD纯度高达99.18%；通过动物实验得出，CBD剂量组均显著改善模型小鼠的抑郁行为（P<0.05）；模型组小鼠的皮层和海马组织中TNF-α、IL-1β和iNos mRNA表达量显著升高（P<0.05）；CBD剂量组的皮层和海马TNF-α、IL-1β和iNos mRNA表达量均显著降低（P<0.05；P<0.01）。结论：采用此方法制备获得CBD具有较高纯度，CBD能够有效改善小鼠的抑郁行为和抑制脑组织皮层和海马的炎症反应。     

热处理温度和离子强度对汉麻蛋白热聚集行为的影响

本研究以汉麻分离蛋白（Hemp Protein Isolate,HPI）为原料,通过超高压辅助酶解反应对HPI进行改性,以溶解度和水解度为判定指标筛选酶解改性反应最佳条件,并探究超高压辅助酶解反应对酶解产物溶解性、起泡性、乳化性、持水性、持油性的影响。结果表明,HPI酶解反应最适条件为：加酶量（复合蛋白酶）5000 U/g、酶解改性pH8.0、酶解改性温度55 ℃、酶解改性时间50 min。以HPI为对照,当压力为200 MPa时,酶解产物的溶解度、起泡性、乳化性、持油性最高,压力为100 MPa时,泡沫稳定性最好,酶解后的乳化稳定性存在不同程度的下降,压力为0.1 MPa时其持水性达到最大值。综上所述,超高压技术能够有效促进HPI的酶解改性反应,且压力为200 MPa时,酶解产物的理化性质最好。