烟草突变体库及其在功能基因组研究中的应用

烟草突变体是烟草功能基因组学研究的重要材料。本文综述了烟草突变体在功能基因研究中的作用,构建烟草突变体库的必要性以及烟草突变体库的构建方法,并展望了烟草突变体库在烟草功能基因组学中的应用。     

烟草突变体T-cldf叶片差异ESTs的克隆与分析

为了获得烟叶生长发育过程中相关的基因信息,以烟草突变体T-cldf叶片为Tester材料,以烟草K346叶片为Driver材料,应用抑制性扣除杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建了基因差异表达文库,代表在突变体T-cldf叶片中特异表达的cDNA.对随机挑选的部分克隆,经过PCR检测和点杂交筛选的阳性克隆进行序列测定,并与GenBank数据库中的序列进行BLAST比较分析,获得62个表达序列标签(ESTs,已登录GenBank数据库),按照其功能可以分为7类.其中与烟草光合作用相关的ESTs有9个,与结构蛋白相关的有4个,与生理代谢相关的有11个,还有11个基因功能信息未知的ESTs和20个在烟草中首先获得的ESTs.     

淀粉类酶降解鲜烟叶中淀粉的研究

为降低烤后烟叶中淀粉含量,研究了烘烤过程中外加淀粉类酶对淀粉降解的影响.结果表明,烘烤过程中,通过外加淀粉类酶来降解烤烟中的淀粉是有效的.烘烤变黄初期,不同外加淀粉类酶烟叶淀粉降解动态基本一致;变黄后期至定色前期,淀粉降解随外加酶量增加而加剧.烤后烟叶淀粉含量随外加酶量增加而减少,水溶性糖和还原糖含量随外加酶量增加而增加.方差分析表明,不同处理烤后烟叶之间淀粉含量存在极显著差异.多重比较结果表明,K326品种适宜的外加酶量为(6 60)U/g;HD品种适宜的外加酶量为(8 80)U/g.     

不同抗性烟草品种内源激素对赤星病胁迫的响应差异

为进一步明确烟株内源激素与赤星病抗性的关系,以抗赤星病烟草品种净叶黄和感病品种长脖黄为研究对象,通过盆栽种植并接种赤星病菌,比较不同抗性品种内源激素含量对赤星病胁迫的响应差异。研究结果显示,在赤星病胁迫下,净叶黄、长脖黄的脱落酸（ABA）含量和乙烯（ET）释放量均呈上升趋势,而生长素（IAA）以及细胞分裂素（CTK）含量表现为降低。同时,赤星病胁迫导致净叶黄的赤霉素（GA）、茉莉酸（JA）含量增加,引起长脖黄的JA含量降低,GA含量则先增加后降低。与净叶黄相比,长脖黄的ABA含量增幅较小,而GA、IAA、CTK与JA含量降幅较大,并且ET释放量较高。综上,在赤星病胁迫下,内源激素的含量差异以及变化幅度可以反映不同品种的抗病能力。     

浅析建筑工程招标控制价的管理

本文通过分析建设工程招标控制价的形成机制,总结了建筑工程招标控制价的管理重点,指出招标控制价管理存在的问题并提出了对策。     

航天条件对烟草几个性状变异的影响

研究了利用"神舟三号"宇宙飞船搭载的4个烤烟品种(K326、K346、红花大金元和春雷3号)SP2(space-2 generation,太空2代)苗期的一些性状变异.结果表明,SP2株系3真叶期幼苗的叶长、宽,叶绿素含量,单位叶面积重和抗坏血酸含量均发生了不同程度的变异,其中部分变异在地面对照与SP2间达到显著或极显著水平.春雷3号-SP2的抗坏血酸(ASA)、总抗坏血酸(T-ASA)和脱氢抗坏血酸(DH-ASA)的含量均比其它品种(材料)高,其中T-ASA含量高出其它品种(材料)1.3-2.6倍,DH-ASA高出2.5-34.0倍.春雷3号-SP2株系是一个可能的高抗坏血酸含量变异类型.     

加拿大烤烟生产和品种的选育推广

在实地考察和资料调研的基础上归纳了加拿大烟叶生产的组织管理、烟区生态条件、育种方法、新品种选育推广及其配套栽培技术等为主要内容的烟草科研与生产情况，着重叙述了以品种选育利用为中心的育种技术、烟田轮作制度等配套技术措施。     

烟草叶片表面抗性蛋白T-phylloplanin基因的克隆

从烟草突变体T-cldf叶片表达基因的SSH文库中,筛选到一个与真茵抗性相关的表达序列标签P1T10(GenBank Access No.EBl02896).以P1T10序列为模板设计引物,用末端快速扩增(RACE)技术扩增得到T-Phylloplanin的cDNA全长(GenBank Access No.DQ451214).利用DNA STAR软件的EditSeq程序(Version 5.01)分析T-Phylloplanin基因,显示它包含一个完整的开放读码框,编码一个含有110个氨基酸、等电点为7.74、分子量为11.3 kD的小分子量蛋白(GenBank Access No.ABE03627).通过BLAST比对发现它与烟草叶片的一个表面抗性蛋白全长基因(GenBank Access No.AY705384)的同源性为93%.通过半定量RT-PCR分析表明,T-Phylloplanin在烟草突变体T-cldf叶片中的表达量高于烟草K346.     

烟草侧芽生长相关基因克隆及RNAi载体的构建转化

为了培育打顶后不长侧芽的烟草植株,通过同源克隆,在烟草(品种K326)中得到了与侧芽生长相关基因的1个片断,将该片段序列通过BLAST检索Genbank同源比对,发现该基因同番茄的LS基因有非常高的同源序列,另外与水稻的MOC基因、拟南芥的LAS基因也有一定的同源性,命名为TLR基因.将TLR基因阅读框内640 bp的正向和反向片断构建到RNAi载体pHANNIBAL内含子两侧,再经NotI酶切回收约4300 bp目的片段,并插入到双元载体质粒pART27中,成功构建了含TLR基因片段正反向重复序列的植物表达载体pHANNIB AL-TLR-P ART27.将pHANNIB AL-TLR-P ART27质粒导入根癌农杆菌LBA4404中并转化烟草叶片细胞,没有得到转基因再生植株,推测这与TLR基因表达被抑制有关.     

有机肥及施氮水平对烟叶质量和可用性的影响

由于产量因子的限制作用越来越小,烤烟的施氮水平在一定的范围内可以放宽,烟叶生产的余地放宽,烟叶质量的多样性才能得到充分体现.在一定的施氮水平下,有机肥的施用对提高烟叶产量,改善烟叶品质方面有积极作用,特别在增加烟叶的香气量和改善烟叶的吃味方面有较明显作用,但是烟叶的刺激性也有一定程度的增加;在烟叶化学成分上,增施有机肥有一定负面影响,表现在烟碱和总氮含量都有一定程度的增加.研究结果表明,在试验条件下,施氮量在90 kg/hm2以下时,增施有机肥不会影响烟叶的可有性.