灵芝菌丝体多糖的分离纯化及其单糖组成分析与分子量测定

前期杂交优化后赤芝菌种经液体深层发酵后,提取灵芝菌丝体多糖,并过DEAE-Sepharose Fast Flow柱分离纯化,利用高效体积排阻色谱(HPSEC)检测多糖级分的纯度,采用完全酸水解PMP柱前衍生化RP—HPLC测定多糖级分的单糖组成,多角度光散射仪联用装置(SEC—MALLS)测定其绝对重均分子量(Mw),并且根据分子旋转半径与分子摩尔数的关系曲线斜率初步推断其空间构象。结果显示:分离纯化得到3个多糖级分GLMP1、GLMP2和GLMP3,HPSEC检测其峰面积百分比分别为93.58%,97.64%,99.19%,单糖组成分析结果表明GLMP1、GLMP2和GLMP3均含有甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖,但单糖摩尔比各异。SEC—MALLS测试GLMP1、GLMP2和GLMP3的Mw分别为4.526×105,4.603×104,3.760×103 g/mol,3个多糖级分构象可能均为高度紧缩且具有分支结构的聚合物。     

耐热β-木糖苷酶的构建及在木糖制备中的应用

β-木糖苷酶在完全快速降解木聚糖类半纤维素为木糖的过程中起重要作用.海栖热袍菌(Thermotoga maritima)是一个极端嗜高温厌氧细菌,所产耐热酶类具有非常可观的工业应用前景,但这类酶在大肠杆菌中的表达很低.采用基因重组技术将源自海栖热袍菌的具有阿拉伯糖苷酶活性的耐热β-木糖苷酶基因克隆至表达载体pET-28a,与组氨酸标签融合表达构建重组质粒pET-28a-xyl,然后转化不同大肠杆菌宿主,结果在大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIL中获得高效表达;重组酶蛋白经诱导表达、破胞和热处理后纯度在90%以上,经Ni2 亲和层析后达电泳纯;用HPLC和TLC检测酶解产物,β-木糖苷酶和木聚糖酶联合水解后,酶解产物主要为木糖,外加阿拉伯糖苷酶后能使其酶解产物中木糖含量明显提高.因此,具有阿拉伯糖苷酶活性的耐热β-木糖苷酶在木糖制备中具有重要的工业应用价值.     

固相萃取-高效液相色谱法测定猪肝中的大环内酯类抗生素

建立了猪肝中大环内酯类抗生素螺旋霉素(SPI)、北里霉素(KIT)、替米卡星(TILM)和泰乐菌素(TYL)的高效液相色谱(二极管阵列检测器)检测方法。样品经甲醇提取,Bond Elut SCX固相萃取柱(500 mg,3 mL)净化,液相色谱分析采用Waters Atlantis~(TM)dC_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.025 mol/L磷酸缓冲液-乙腈(pH 2.5)梯度洗脱,流速为1.0 mL/min。方法的检出限为0.01～0.037μg/mL,在0.2～20μg/ mL范围内峰面积与质量浓度成良好线性关系,相关系数大于0.998。在2、0.5、0.2μg/mL 3个添加水平下,回收率范围为69.2%～93.2%,精密度<12。方法灵敏,实用性强。     

极耐热性阿拉伯糖苷酶在木糖制备中的应用

阿拉伯糖苷酶作为木聚糖降解的限速酶之一,在植物残体的生物转化、食品加工、饲料工业以及纸浆漂白中具有广泛的应用潜力。实验中选择pET—28a作为表达载体,优化核糖体结合位点RBS与起始密码子ATG间距离,使来自海栖热袍菌(Thermotoga maritima)极耐热性阿拉伯糖苷酶得到高效表达,重组酶蛋白经一步热处理后纯度达到90%以上;木聚糖酶解试验结果表明,阿拉伯糖苷酶和木聚糖酶间存在协同作用;阿拉伯糖苷酶与木聚糖酶和β-木糖苷酶联合水解木聚糖能明显提高酶解产物中木糖含量,因此,开发极耐热性阿拉伯糖苷酶在酶法制备木糖中的应用具有重要的经济效益和社会效益。     

脑白金口服液中低聚异麦芽糖含量的测定

建立了高效液相色谱法测定脑白金口服液中低聚异麦芽糖含量的方法:通过固相萃取柱对样品进行净化,采用氨基色谱柱及钙型阳离子交换色谱柱双柱结合的方法对脑白金口服液中低聚异麦芽糖各组分及其总量进行测定,经过方法学考察,该方法准确可靠、重复性好,可用于实际样品或类似样品中低聚异麦芽糖的检测。     

丝蛋白肽醒酒活性组分分离纯化及其构效关系研究

以废蚕丝为原料,采用40%CaCl_2溶液将其溶解、透析后得蚕丝蛋白,优化其酶解工艺条件,并将制得的丝蛋白肽经凝胶过滤色谱(HPGFC)和反相液相色谱(RP-HPLC)分离纯化,利用瓦勒-霍赫法考察了不同浓度和组分丝蛋白肽的体外醒酒活性。结果表明,最佳蚕丝蛋白酶解工艺条件为时间240 min、加酶量([E]/[S]) 2. 0%、pH 8. 5、温度60℃、底物浓度5%,该工艺下可获得水解度为23. 22%的丝蛋白肽;体外醒酒活性试验表明有较高ADH激活率的丝蛋白肽浓度为2 mg/mL;经HPGFC和RP-HPLC分离纯化,可分别得到3个和17个组分,其中SFP-II-8组分体外醒酒活性最高,其ADH激活率可达44. 51%;将SFP-II-8组分通过液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱联用分析(UPLC-Q-TOF-MS)后得出其氨基酸序列为L-G-G-V-G-A。     

提取酵母细胞壁中β-D-葡聚糖的新方法

研究了一种从酵母细胞壁中提取β-D-葡聚糖的新方法,包括高温抽提、脱脂和酶解3部分。在高温条件下分别考察了pH、料液比、温度及时间对β-D-葡聚糖得率和纯度的影响。结果表明,高温提取的最佳工艺条件为:料液比为1:15、pH=8、温度120℃,时间3 h,β-D-葡聚糖得率为61.05%,纯度达到41.51%;为了进一步提高β-D-葡聚糖的纯度,采用了脱脂和酶解的方法去除粗多糖中的蛋白质、脂质等杂质,最终产品的纯度达到78.31%。     

绍兴黄酒中一种ACE活性抑制肽的分离和鉴定

首次利用超滤、大孔吸附树脂柱层析和反相色谱法将绍兴黄酒中的肽类组分进行分离制备,并进行了血管紧张素转换酶(ACE)的活性抑制试验,通过高效液相色谱/电喷雾电离质谱联用分析和氨基酸组成分析鉴定出一种ACE活性抑制肽的氨基酸序列为Gln-Ser-Gly-Pro。     

HPLC测定牛奶和虾仁中氯霉素残留

建立了一种检测虾仁和牛奶中氯霉素残留的高效液相色谱(紫外检测，即LC／UV)方法和液相色谱—电喷雾电离质谱联用(LC／ESI—MS)检测方法。色谱分离选用Symmetry C18柱，以乙腈—水为流动相，紫外检测波长为278nm，质谱采用选择性离子检测(M／Z321．0，[M—H]^-)。样品制备省去传统的多次液—液萃取过程，采用有机溶剂直接提取，转溶后，用固相萃取方法净化样品，虾仁和牛奶样品的平均回收率分别为93．7％和96．0％；检测限：LC／UV为2．5μg／kg和8．3μg/kg；LC／ESI—MS为1．3μg／kg和4．5μg／kg。方法准确灵敏，样品预处理较简便快速。     

超声辅助酶法提取废次烟叶中绿原酸、烟碱工艺研究

将超声波技术与酶法相结合提取烟叶中的绿原酸和烟碱。通过实验得出最适宜的酶为纤维素酶;在单因素实验的基础上,通过正交实验优化超声波辅助酶法同时提取绿原酸和烟碱的最佳条件为:酶用量1%(以烟叶质量计)、酶解时间1.5h,酶解温度50℃。在最佳条件下,绿原酸的提取率为91.5%,烟碱的提取率为92.2%,与其他提取方法比较,超声波辅助酶法对烟叶中绿原酸、烟碱的提取具有明显的促进作用。