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1.
目的 构建大肠杆菌K99菌毛表达载体。方法 通过逐级亚克隆的方法克隆k99菌毛形成亚单位基因(fanC),并进行序列测定和fanC亚单位的抗原决定簇模拟,以确定突变部位。结果 克隆了包括K99菌毛形成亚单位基因(fanC)和部分fanD基因在内的一段基因,该基因与国外报道相比明显偏大。序列测定表明:在fanC尾部多出 24bp,在fanC与 fanD,的结合部有一 800bp左右的新基因。经与基因库中大肠杆菌基因作同源性比较发现,该新基因为768bp的插入序列IS1。其他基因为K99自身fonC与fanD片段之间的过渡基因。IS1的插入未改变fanD,基因的阅读框架,只是使fanD片段末端增加了 8个氨基酸。fanC亚单位的抗原决定簇模拟结果显示,K99 fanC片段具有一个非常突出的亲水区域,根据经验它应是抗原决定簇所在的部位。结论 首次发现大肠杆菌K99基因中含有插入序列IS1。  相似文献   
2.
生长抑素基因在大肠杆菌pThioHis表达系统中的克隆与表达   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 在大肠杆菌表达系统中高效表达生长抑素 (SS)基因。方法 以天然SS的氨基酸和基因序列为标准 ,将大肠杆菌使用频率较低的密码子分别更换成了使用频率较高的密码子 ,在SS基因的两端加上了合适的酶切位点 ,头部 :KpnI和NcoI;尾部 :PstI(这一酶切位点可与NsiI的切口互补 )。克隆至pThioHisA质粒的KpnI/PstI酶切位点后 ,再克隆至pThioHisA质粒的KpnI/NsiI酶切位点 ,使SS基因分别位于多克隆位点的尾部和前部。结果 重组质粒经酶切鉴定和基因序列测定证明 ,基因完全正确 ,在大肠杆菌TOP10中均得到较好的表达 ,IPTG诱导后 4h表达量基本达到最高 (37℃ ) ;在A60 0 0 .4~ 1.5之间用IPTG诱导均可获得到较好的表达 ,但以 0 .6左右为最佳诱导时机 ;在LB、TB和 2YT培养基中表达量依次为 :TB >LB >2YT ;表达的SS融合蛋白基本为水溶性的 ,具有良好的SS抗原性和免疫原性。结论 为基因工程SS大肠杆菌疫苗的研制奠定了基础  相似文献   
3.
重组生长抑素(SS)大肠杆菌疫苗促进动物生长的效果   总被引:2,自引:0,他引:2  
[摘 要]目的 验证重组SS大肠杆菌疫苗促进动物生长的效果。方法 由SS融合蛋白与弗氏不完全佐剂制成实验用疫苗,皮下注射BALB/c小鼠、去势仔公猪、妊娠初产母猪和羔羊等动物,并观察体重变化。结果 与Vector Vaccine相比,Vaccine-1和 Vaccine-2可分别使雌性小鼠提高增重 10.28%和 15.63%;对雄性小鼠的作用不明显。用SS融合蛋白疫苗免疫去势仔公猪,免疫后89天提高增重7.2%;免疫初产母猪,所产28日龄仔猪可比载体对照组仔猪提高增重11.81%,比44日龄仔猪提高增重17.95%;免疫母羔羊58天可比载体对照组提高增重15.64%,90天提高增重28.2%;免疫公羔羊变化不明显。用SS融合蛋白疫苗免疫小鼠,其血清中抗因抗体阳性率为75%。结论 重组SS大肠杆菌疫苗能促进雌性小鼠、去势仔公猪、妊娠初产母猪所产仔猪和母羔羊增重,但对雄性小鼠和公羔羊无作用。  相似文献   
4.
目的 构建和筛选既能稳定、高效表达SS融合蛋白,又能使这种融合蛋白保持良好的SS抗原性和高水溶性等特点的重组质粒。方法 用 BamH I/Xho I (B/X)和 BamH I/EcoR I(B/E)双酶切,将含有SS基因的片段由pThioHis A中切出,然后分别克隆到 pT7ZZa中的相应酶切位点,得到pSSB/X(短尾)和pSS-B/E(长尾)两个重组质粒,用常规表达技术在大肠杆菌中对其进行表达。结果 pSS-B/X和pSS-B/E两个重组质粒在宿主菌BL21(DE3)中均获得表达,pSS-B/X获得高效表达后融合蛋白占菌体总蛋白的30.6%。两个表达菌经超声裂解后电泳发现,SS-B/X-ZZ和SS-B/E-ZZ这两种融合蛋白基本为可溶性蛋白,沉淀中含量极低。二者均具有良好的抗原性,结论pSS-B/X重组质粒很有希望成为SS基因疫苗的候选质粒。  相似文献   
5.
为同时测定食品中的副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌,建立了基于TaqMan探针的双重Real-time PCR方法.针对副溶血性弧菌的gyrB基因序列和金黄色葡萄球菌coa基因序列分别设计引物和TaqMan探针,建立双重Real-time PCR 检测体系,制作校正曲线,同步定量检测副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌.建立的双重Real-time PCR方法对2种细菌菌液的检测敏感度均低于10 CFU/PCR反应体系,相关系数均为1.00,整个试验可在2 h内完成.建立的方法可用于食品中副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌的快速、同步、定量检测。  相似文献   
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