抗玉米赤霉烯酮单克隆杂交瘤细胞系的建立及单抗生产

为快速检测食品中的玉米赤霉烯酮 (Zearalenone以下简称ZEN) ,建立了抗ZEN的单克隆杂交瘤细胞株。用ZEN BSA偶联物免疫 8～ 10周龄雌性BalB c小鼠后 ,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2 0融合 ,经过 4～ 5次亚克隆建立了稳定分泌抗ZEN抗体的杂交瘤细胞株 ,分别命名为Z2A4、Z8D6。将上述 2种杂交瘤细胞分别注入BalB c小鼠腹腔 ,获得含抗ZEN单克隆抗体的腹水。将腹水用饱和硫酸铵盐析法纯化 ,得到Z2A4、Z8D6单克隆抗体。经鉴定 ,其亚类为IgG1,抗体腹水效价Z2A4和Z8D6分别为 1∶1 6× 10 6和 1∶3 2× 10 6;分子量均为 15 0 0 4 0 (15 0kD) ;参考工作浓度分别为1∶4 0 0 0 0和 1∶10 0 0 0 0 ;纯化后抗体IgG含量分别为 34和 39mg ml ;抗体与其它霉菌毒素无交叉反应(交叉反应率 <1% ) ,具有较高特异性 ;抗体亲和力常数Z2A4和Z8D6分别为 5 5 2× 10 8和 4 6 8×10 9mol L。     

山东临沂部分地区2012年产花生真菌污染调查

对山东临沂地区5个花生主产区2012年产花生真菌污染情况进行调查。方法 分别采集收获前1个月的花生和土壤样品,及收获期、收获后储存1个月、收获后储存3个月的花生样品,分别以点种法(花生样品)和稀释法(土壤样品)接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平板,于(28±1) ℃培养5d后进行菌落计数并鉴定。结果 临沂部分地区花生样品100%受真菌污染。不同地区花生样品污染真菌的菌相不同,同一地区不同采样期花生样品污染的菌相也有差异;但各采样期花生样品中黄曲霉污染水平均较低(平均4.38%)。结论 山东临沂部分地区花生样品虽受黄曲霉污染较轻,但其它真菌污染严重,因此应加强花生种植、采摘、贮藏过程的防霉管理。     

抗河豚毒素单克隆抗体联酶前纯化条件优化的研究

目的 了解不同辛酸浓度下盐析法、不同离心力对抗河豚毒素(TTX)单克隆抗体的纯化效果以及纯化后酶标抗体性能的影响,优化出纯化抗TTX单克隆抗体的方法,为免疫学方法检测TTX提供依据.方法 在传统辛酸-硫酸铵蛋白纯化方法的基础上进行改进,考察不同的辛酸浓度、不同的离心力对抗TTX单克隆抗体纯化效果的影响,并将纯化后抗体与辣根过氧化物酶(HRP)连接,用间接竞争酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测酶标抗体的生物学活性及各项性能指标并比对.结果 不同方法纯化获得的抗体及其酶结合物的各项指标参数、活性不同,当腹水稀释液与辛酸体积比为1 000∶11、纯化过程中离心力10 000 r/min时纯化获得的抗体虽然产量有所下降但纯度较高,酶标抗体的生物活性、各项指标均最优.结论 经过对抗TTX单克隆抗体纯度、抗体中蛋白含量、酶标抗体各项性能指标的对比,优化出用于抗TTX抗体纯化用腹水稀释液与辛酸比值1 000∶11 (V/V)、离心力10 000 r/min的试验条件.     

GII.3型诺如病毒重组衣壳蛋白的表达和纯化鉴定

目的通过杆状病毒表达系统,获取高纯度GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白,为制备抗GⅡ.3型诺如病毒单克隆和多克隆抗体提供免疫原。方法将GⅡ.3型诺如病毒衣壳蛋白基因片段修饰后插入p HTA表达载体中,经测序鉴定,将鉴定正确的重组质粒转化到MAX Efficiency~DH10Bac~(TM)感受态细胞中,获取表达杆粒并转染SF9细胞,表达GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白。重组蛋白用Ni-NTA His蛋白亲和柱纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹(Western blot)方法鉴定。结果 SDS-PAGE和Western blot结果表达了分子量约为60 k Da的重组蛋白,动物试验表明重组蛋白具有较好的免疫原性,为制备抗GⅡ.3型诺如病毒单克隆抗体和多克隆抗体、建立相应的免疫学检测方法奠定了基础。结论构建了GⅡ.3型诺如病毒衣壳蛋白表达载体,并获得GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白。     

免疫磁珠富集联合荧光定量PCR快速检测牛肉馅中产志贺毒素大肠埃希菌O26∶H11

建立肉制品中免疫磁珠富集(IMS)联合实时荧光定量PCR(qPCR)技术快速检测牛肉馅中产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)O26∶H11的方法。方法 建立针对编码O26抗原wzx基因实时荧光定量PCR方法,并验证其特异性和敏感性;人工污染不同浓度STEC O26∶H11的牛肉馅样品,在增菌不同时间后,将增菌液原液、增菌液经免疫磁珠特异性捕获分离物分别进行qPCR检测及平板分离。结果 qPCR检测O26∶H11可产生特异性荧光信号,而23株其他血清型的大肠埃希菌及7株其他种属细菌均未见荧光信号;本方法对纯培养的检测限为5×10^2cfu/ml。人工染菌试验中,当初始染菌浓度达到或高于3×10^2cfu/25g时,增菌培养6h后IMS捕获物可以检测到荧光信号。培养20h后,初始染菌浓度为3SymboltB@10-1 cfu/25g以上,对增菌液直接检测和IMS捕获物检测都可以检测到荧光信号。初始污染浓度较低时,增菌6h后IMS-qPCR的检测灵敏度高于增菌液直接qPCR检测;IMS捕获物涂布显色培养基分离目标菌检测灵敏度高于增菌液直接涂布;CHROMagar STEC显色培养基分离STEC O26∶H11的检测灵敏度高于山梨醇麦康凯培养基(SMAC)。结论 IMS联合qPCR检测食品中的STEC O26∶H11具有特异性强、敏感度高、快速、易操作等特点,可以提高样品中STEC O26∶H11菌的检出率,适用于牛肉制品中STEC O26∶H11的快速检测。     

食品工业用菌的病原性研究

为研究食品工业用真菌的致病性 ,将不同浓度的米曲霉和黑曲霉孢子经小鼠尾静脉注射 ,观察 14d内动物出现的中毒症状、死亡和体重变化 ,实验终结时测定脑、肝、肾、脾中的生存菌数 ,同时作病理组织学检查。结果表明 ,2个菌种对小鼠造成的主要损害为肾脏化脓性病变 ,1× 10 5以上剂量组小鼠 2个以上脏器同时检出活菌。米曲霉 1× 10 5以上剂量组动物出现了中毒症状和死亡 ,黑曲霉实验组动物未见中毒和死亡。致病性随染孢子量的增加而加重 ,呈正剂量 -反应关系。本研究为完善我国食品工业用菌安全性评价体系提供了依据     

山东临沂部分地区2014年产花生真菌及黄曲霉毒素污染调查

中文：目的 对山东临沂地区五个花生主产区2014年产花生真菌及黄曲霉毒素污染情况进行调查。方法 分别采集收获前1个月的花生和土壤样品、收获期、收获后贮藏1个月及3个月的花生样品,花生和土壤真菌菌相调查分别采用点种法和稀释法接种马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平板,于28±1℃培养5后进行菌落计数并鉴定;黄曲霉毒素含量采用高效液相色谱法测定。结果 临沂不同地区花生和土壤样品污染的真菌菌相不同,土壤样品真菌菌相更为丰富,但黄曲霉(7%)及黄曲霉毒素(1%)污染水平均较低。结论 山东临沂部分地区花生样品受黄曲霉及黄曲霉毒素污染较轻,但仍需注意土壤中其它真菌污染,可以有效预防花生中真菌及其毒素污染和减少人类膳食暴露。     

COI及cytb基因对河鲀鱼鱼种鉴定的适用性研究

目的建立河鲀鱼DNA条形码鉴定方法,探讨细胞色素氧化酶亚基I(COI)及细胞色素b(cytb)基因对我国常见东方鲀属、兔头鲀属河鲀鱼鱼种鉴定的适用性。方法野捕河鲀鱼经形态学鉴定后,钓取COI及cytb基因序列并测序。从Gen Bank下载已有河鲀鱼参考序列,分别构建COI及cytb基因分子进化树,确定样品种属并与形态学鉴定比对。应用所建方法对中毒样品进行河鲀成分鉴定。结果 COI和cytb基因分子进化树将57份样品聚类到东方鲀属和兔头鲀属的9个鱼种,除棕斑兔头鲀和暗鳍兔头鲀(COI进化树)、暗纹东方鲀和晕环东方鲀(cytb进化树)外,2种条形码均能对其余鱼种进行有效区分。中毒样品经鉴定均含有月兔头鲀。结论所建立的DNA条形码方法可有效鉴定河鲀鱼鱼种,弥补形态学鉴定的缺陷。     

ICR小鼠与BalB/c小鼠在构建正常小鼠模型中的比较

小鼠模型广泛应用于食品科学、毒理学及相关学科。为提供ICR小鼠和BalB／c的背景，本研究考察了10项免疫指标治疗。选用ICR小鼠、BalB/c小鼠各60只，按《保健食品功能学评价程序和检验方法》进行试验。在迟发型变态反应(DTH)、半数溶血值、巨噬细胞鸡红细胞吞噬率、NK细胞活性4项指标中，BalB／c小鼠显优于ICR小鼠，揭示在这4项实验中BalB／c小鼠应为首选。在脾脏体重比值、ConA刺激的小鼠淋巴细胞转化、单核—巨噬细胞碳廓清能力、巨噬细胞鸡红细胞吞噬指数4项指标中，两种小鼠差异没有显性，因此在这4项实验中ICR小鼠可以替代BalB/c小鼠。另外，在胸腺体重比值、小鼠的抗体生成细胞数两项指标中，ICR小鼠的表现优于BalB/c小鼠，其机理还不明了，有待进一步研究。