咖啡酸与牛血红蛋白的相互作用及抗氧化研究

为研究不同溶剂体系对咖啡酸与牛血红蛋白相互作用及其抗氧化性的影响。在水溶液、10%乙醇和10%二甲基亚砜体系中,通过紫外光谱、荧光光谱、同步荧光光谱、红外光谱和对DPPH自由基和ABTS+自由基清除能力的测定,研究咖啡酸和牛血红蛋白的相互作用及其对咖啡酸抗氧化性的影响。结果表明,在3种不同溶剂体系中,随咖啡酸浓度的增加,其对牛血红蛋白的荧光猝灭均逐渐增强,猝灭方式和相互作用均分别为静态猝灭和疏水作用,结合位点更靠近Trp残基,牛血红蛋白空间构象更加伸展。在10%乙醇和10%二甲基亚砜体系中,牛血红蛋白的酰胺I带和酰胺II带发生明显红移且二级结构由α-螺旋逐渐向β-折叠转变。牛血红蛋白-咖啡酸复合物显著降低了咖啡酸对DPPH自由基的清除率,但对ABTS+自由基的清除率无明显影响。在3种不同溶剂体系中,咖啡酸均可使牛血红蛋白空间构象发生改变,同时牛血红蛋白也会不同程度地影响咖啡酸的抗氧化性。     

乳苣多酚提取工艺及抗氧化研究

利用正交试验研究不同因素对乳苣多酚得率的影响,探讨了乳苣多酚的抗氧化活性.结果表明,各因素对多酚得率的影响为:固液比＞乙醇浓度＞提取温度＞提取时间;正交试验得到最佳提取工艺为:提取时间40min,提取温度35℃,固液比1∶25,乙醇浓度55％vol.在此条件下,多酚得率为36.95％.RSD为1.99％.体外抗氧化试验表明,乳苣多酚对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基均具有一定的清除效果,且清除作用随浓度增大而增强.研究表明,乳苣多酚有望进一步开发成天然抗氧化剂.     

雪莲果过氧化物酶的特性和抑制研究

以新鲜雪莲果为材料,对雪莲果过氧化物酶(POD)的特性进行了研究,并探讨了不同抑制剂及激活剂对酶活性的影响。结果表明:雪莲果过氧化物酶最适反应pH值为6.0,最适反应温度为35℃,最佳反应底物(愈创木酚)浓度为0.008mmol/L,最大反应速度Vmax=135U/(min.g),米氏常数Km=0.004182mol/L。在0~200mmol/L范围内,抑制剂对POD的抑制作用为NaHSO3>L-cys>柠檬酸>VC>EDTA。在0~10mmol/L范围内,激活剂对POD激活作用为CuSO4>FeCl3。     

乳苣不同溶剂提取物对α-淀粉酶的抑制作用及光谱研究

利用3,5-二硝基水杨酸(DNS)和8-苯胺-1-萘磺酸(ANS)荧光探针法,研究乳苣不同溶剂提取物对α-淀粉酶的抑制作用和类型、紫外光谱和表面疏水性的影响。结果表明:水、正丁醇、石油醚、氯仿和乙酸乙酯提取物对α-淀粉酶的半抑制浓度(IC_(50))分别为2.002、4.086、1.248、4.299和6.904 mg/m L。水提取物对α-淀粉酶为可逆非竞争性抑制,抑制常数(K_i)为1.653 mg/m L。正丁醇提取物对α-淀粉酶为可逆混合性抑制,K_i和酶-底物络合物抑制常数(K_(is))分别为0.795和0.435 mg/m L。石油醚提取物对α-淀粉酶为不可逆竞争性抑制,K_i为2.893 mg/m L。水、正丁醇和石油醚提取物可增强α-淀粉酶紫外吸收,但均不改变吸收峰。水提取物增强ANS荧光强度,低浓度正丁醇提取物增强了荧光强度,高浓度则降低了荧光强度,石油醚提取物则与此相反。另外,各提取物均使ANS发生蓝移。该研究可为进一步开发天然淀粉酶抑制剂提供理论依据。     

响应面法优化乳苣总生物碱的提取工艺的研究

在单因素预试验的基础上,以酸性乙醇为溶剂,提取乳苣总生物碱。选取提取溶剂pH值、提取温度、提取时间及液固比4个因素进行Box—Benhnken中心组合设计,利用响应面分析法对其提取工艺参数进行优化。结果表明,提取溶剂95％乙醇的pH值4．93,提取时间2．21h,提取温度79．91℃,液固比25：1,此条件下总生物碱提取率为20．06％。根据实际试验情况,将其修正为95％乙醇pH值4．9,提取时间130min,提取温度80℃,液固比25：1。     

丝瓜过氧化物酶的特性和抑制作用研究

研究丝瓜过氧化物酶最适温度、最适pH值、Km、Vmax及最适底物,同时通过正交试验探讨不同抑制剂组合对丝瓜过氧化物酶的抑制作用.结果表明,丝瓜过氧化物酶最适温度为45℃,最适pH值为5.0,以邻苯三酚为最适底物,Km=0.001516 mol/L,Vmax.=440.7U/(min·g).正交试验结果表明,最佳抑制剂组合为6mmol/L柠檬酸+6mmol/L EDTA+6mmol/L半胱氨酸+6mmol/L VC.在此条件下抑制率为58.89％.     

山药过氧化物酶的特性及抑制研究

以愈创木酚为底物,470nm处测定山药过氧化物酶(POD)的活性,研究了温度、pH、底物浓度、酶浓度、抑制剂和激活剂对其活性的影响。结果表明,山药过氧化物酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6.0,Km=0.08231mol/L,Vmax=541.518U/(g·min);五种抑制剂对POD的抑制作用由强到弱依次为:VC>L-Cys>NaHSO3>柠檬酸>EDTA,两种激活剂对POD活性的激活作用由强到弱依次为:CuSO4>FeCl3。     

没食子酸与牛血清白蛋白相互作用研究

利用荧光光谱和紫外吸收光谱研究没食子酸与牛血清白蛋白相互作用的机制。在模拟人体生理条件下,根据25℃和37℃时没食子酸对牛血清白蛋白的荧光猝灭作用,计算其猝灭常数、结合常数、结合位点及结合距离,并推测猝灭机制及相互作用的作用力类型。结果表明,没食子酸对牛血清白蛋白有较强的荧光猝灭作用。25℃和37℃时,其荧光猝灭常数K,分别为：7．28×10^11和8．16×10^11L·mol^-1·S^-1;结合常数KA分别为5．01×10^3和5．37×10^3mol／L;结合位点数分别为1．91和1．71;结合距离为4．12nm。热力学分析数据表明该结合过程是一个熵增的自发过程。因此,没食子酸对牛血清白蛋白的荧光猝灭机理符合静态猝灭机制,二者作用以疏水作用力结合为主。     

3种不同溶剂中根皮苷与牛血红蛋白的相互作用及抗氧化性

在dH₂O、10% DMSO和10% EtOH溶剂体系中,利用紫外光谱、荧光光谱、同步荧光光谱和红外光谱法及对DPPH和ABTS自由基清除法,研究牛血红蛋白与根皮苷的相互作用及对根皮苷抗氧化性的影响。结果表明:在3种不同溶剂体系中,随根皮苷浓度的不断增加,其对牛血红蛋白的荧光猝灭均逐渐增强,猝灭机理均为静态猝灭和非辐射能量转移,相互作用力以范德华力和氢键为主,根皮苷与牛血红蛋白的结合位点更接近Trp残基。在dH₂O体系中,酰胺Ⅰ带和Ⅱ带发生轻微红移。除10% EtOH-DPPH体系外,根皮苷-牛血红蛋白均增加了根皮苷对DPPH和ABTS自由基的清除率。该研究表明,溶剂极性可不同程度影响根皮苷与牛血红蛋白的相互作用和抗氧化性。     

响应面法优化荸荠淀粉酶解工艺及动力学研究

以葡萄糖当量值(DE)为考察指标,利用单因素和响应面法对α-淀粉酶酶解荸荠淀粉工艺进行优化,并计算相应酶解动力学参数。结果表明:α-淀粉酶酶解荸荠淀粉优化工艺为:时间88min、温度53℃、E/S=0.12U/mg和p H7.7。在此条件下,验证实验DE为(53.393%±0.899%)。在p H7.0,60℃条件下,Km=47.298mg/m L,Vmax=0.335mg/(m L·min),Ea=11.995k J/mol,△H=71.882k J/mol。