壬基酚异构体NP42对小鼠RAW264.7巨噬细胞的损伤作用

目的:研究壬基酚异构体NP42对小鼠巨噬细胞RAW264.7的损伤作用并探究其分子机制。方法:以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象,将不同浓度NP42(0.1~100 μmol/L)作用于细胞24 h,采用噻唑蓝法检测细胞存活率,酶联免疫分析检测环磷酸鸟苷(cGMP)和环磷酸腺苷(cAMP)含量,RT-PCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)mRNA的表达水平,Western blot法检测蛋白激酶C(PKC)的表达情况以及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38-MAPK)的磷酸化水平。结果:0.1~10 μmol/L NP42对细胞存活率无显著影响,100 μmol/L NP42能显著降低RAW264.7细胞的存活率(P < 0.01)。与对照组相比,NP42处理24 h能显著抑制细胞TNF-α mRNA和iNOS mRNA的表达,抑制细胞PKC蛋白的表达和降低细胞内cAMP的含量,同时增强细胞内cGMP的含量。NP42处理能显著下调p38的磷酸化水平。结论:壬基酚异构体NP42通过PKC-cAMP信号通路以及p38-MAPK信号通路对小鼠巨噬细胞RAW264.7产生损伤作用,这可能是壬基酚发挥免疫损伤的主要分子机制。     

硬脂酸修饰的燕麦多糖自聚集胶束的制备及其特性初探

两亲性聚合物在水系中能够自发形成具有壳核结构的自聚集纳米级胶束,这种胶束能够利用自身亲水作用改善疏水性物质的溶解性,进而日益获得关注和认可。本文以燕麦β-葡聚糖为原料,利用疏水性饱和脂肪酸——硬脂酸对其进行酯化改性,得到两亲性燕麦β-葡聚糖酯。通过探究硬脂酸酰基咪唑活化液的添加量、反应温度以及反应时间对酯化反应产物取代度的影响,得出当脂酸酰基咪唑活化液添加量6.50 mL,反应温度90℃,反应时间5.0 h时,酯化反应产物取代度最大,为0.133。采用傅里叶红外光谱及氢核磁共振分析技术对所得产物进行表征,所得结果均证明此方法可成功制备两亲性燕麦β-葡聚糖酯。在探讨其相关物理性质后,做体外细胞毒性试验,发现燕麦β-葡聚糖硬脂酸酯无细胞毒性。以上结果表明燕麦β-葡聚糖酯作为疏水性活性物质的新型运载材料,可有效解决大多数疏水性活性物质生物利用率低的现状,其在医药、食品、化工等多领域拥有更广阔的发展前景。     

N-乙酰-半胱氨酸干预壬基酚对小鼠Sertoli TM4细胞的损伤作用

目的：研究N-乙酰-半胱氨酸（N-acetyl-cysteine,NAC）对壬基酚（nonylphenol,NP）诱导的小鼠Sertoli TM4细胞氧化损伤及凋亡的干预作用。方法：以Sertoli TM4细胞为对象,实验分为对照组、NP组（20 μmol/L NP处理）、NP＋NAC组（5 mmol/L NAC预处理4 h后20 μmol/L NP处理24 h）、NAC组（5 mmol/L NAC处理4 h后换正常培养基培养）,采用噻唑蓝法检测细胞存活率;流式细胞术检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量和细胞凋亡情况;试剂盒法检测超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力、过氧化氢酶（catalase,CAT）活力、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量及Caspase-3相对活力;Western blot法检测细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）磷酸化情况。结果：与对照组相比,20 μmol/L NP处理24 h能显著降低细胞存活率（P＜0.05）,同时诱导细胞内ROS生成,下调SOD和CAT活力,增加MDA含量,诱导Sertoli TM4细胞凋亡,增加Caspase-3相对活力,促进ERK、JNK蛋白磷酸化激活;与NP组相比,NAC预处理能够明显削弱NP引起的细胞内ROS生成,使SOD、CAT活力下调,MDA含量增加,Sertoli TM4细胞凋亡,Caspase-3相对活力增强,激活ERK、JNK信号通路。结论：NAC具有干预NP对小鼠Sertoli TM4细胞损伤的作用,这可能与NAC抑制NP诱导的细胞氧化应激和凋亡以及阻断ERK、JNK信号通路的激活相关。     

大粒车前子多糖对脂多糖刺激RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

采用脂多糖构建RAW264.7巨噬细胞炎症模型,研究大粒车前子多糖的抗炎作用。培养巨噬细胞RAW264.7,利用脂多糖构建细胞炎症模型,中性红吞噬实验检测细胞吞噬活性;酶联免疫吸附法检测车前子精制多糖（Plantago asiatica L. crude polysaccharide,PLCP）处理前后细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosisfactor-α,TNF-α）、白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）和IL-6的分泌量,Griess反应测定RAW264.7细胞释放NO水平。结果表明,PLCP可显著抑制RAW264.7炎症细胞的吞噬活性,降低炎症细胞因子TNF-α、IL-10和IL-6的分泌量及NO的释放量。     

青钱柳多糖对人宫颈癌HeLa细胞和人脐带内皮细胞生长的影响

目的:研究青钱柳多糖(polysaccharides isolated from Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskjk,PCP)对人宫颈癌HeLa细胞和人脐带内皮细胞(HUVEC)生长的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)法,观察不同浓度、不同提取方法获得的PCP对HeLa细胞和HUVEC细胞生长的影响。结果:PCP I、II在50、100、200、400μg/ml浓度条件下,均可极显著性抑制HeLa细胞生长(p<0.01)。PCP I、II对HUVEC细胞生长有一定影响,但增殖抑制率不高;在PCP抑癌作用最高的浓度处(200μg/ml),PCP对HUVEC细胞的生长没有影响。结论:PCP极显著性抑制HeLa细胞的生长;在P C P抑癌作用最高的浓度处,P C P对H U V E C细胞的生长没有影响。     

大粒车前子多糖对树突状细胞分泌不同类型细胞因子的影响

初步探讨大粒车前子精制多糖（PL-PS）对树突状细胞分泌不同类型细胞因子的影响。通过体外细胞因子联合诱导培养小鼠骨髓细胞获得树突状细胞（DCs）。经免疫磁珠分选法纯化获取CD11c＋树突状细胞,经不同浓度PL—PS刺激24h后,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清液中细胞因子IL-12pTO、IL-10及IL-1β含量。结果表明：在质量浓度25—100μg／mL范围内,PL-PS均以剂量依赖的方式上调DCs分泌IL-12pTo和IL-1B水平、下调IL-10的分泌水平。可因此得出推论：PL—PS能够通过调控DCs分泌Th1、Th2型细胞因子及趋化因子水平,诱导Th1型细胞免疫应答。     

黑灵芝多糖对S-180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞cAMP/PKA、IP_3/Ca~(2+)及DAG/PKC信号通路的影响

目的:探讨黑灵芝多糖(polysaccharide from Ganoderma atrum,PSG-1)对S-180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)/细胞蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)、三磷酸肌醇(inositol triphosphate,IP3)/Ca2+及甘油二酯(diacylglycerol,DAG)/蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)信号通路的影响。方法:将S-180细胞接种于BALB/c小鼠体内建立荷瘤小鼠模型,成模后收集腹腔巨噬细胞进行体外培养,用不同浓度的PSG-1干预;ELISA法分别检测巨噬细胞培养上清液中的IP3、DAG和AMP含量;流式细胞仪测定细胞内Ca2+含量;Western blotting测定细胞PKA及PKC蛋白表达。结果:PSG-1在20~160μg/mL质量浓度范围能促进S-180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞产生cAMP、IP3和DAG,同时能增加细胞内Ca2+含量,并显著增强PKA及PKC蛋白表达量。结论:PSG-1能有效激活S-180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞cAMP/PKA、IP3/Ca2+及DAG/PKC信号通路。由此推测,PSG-1可能通过cAMP/PKA、IP3/Ca2+及DAG/PKC信号通路促进S-180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞抗肿瘤作用。     

食物中多糖组分的结构表征与活性功能研究进展

多糖作为高等植物、动物细胞膜及微生物细胞壁组成部分的天然大分子物质,与诸多生理功能密切相关.现代科学研究表明,多糖在生物体中参与了生物合成反应以及多种生命现象和生理过程.多糖研究已成为继蛋白质、核酸研究之后探索生命奥秘的又一个重大前沿课题.多糖的生物学研究非常复杂,其活性功能的分子基础和机理尚不清楚.本文综述了多糖研究的历史,食物中多糖组分的结构表征方法与研究现状,食物中多糖的活性功能研究方法与现状,并对未来食物中多糖研究的热点和发展方向进行了探讨.     

车前子多糖对骨髓来源树突状细胞表型和吞噬功能的影响

目的:探讨车前子多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs)表型和功能的影响。方法:从小鼠骨髓中分离单核细胞,加入细胞因子rmGM-CSF、rmIL-4诱导分化成未成熟树突状细胞,收集细胞加入促成熟刺激剂LPS(阳性对照组)或车前子多糖。倒置显微镜观察树突状细胞的形态,流式细胞术检测成熟树突状细胞的表面标志CD11c和MHCII的表达及吞噬FITC-dextran的变化。结果:经4种不同的车前子多糖作用40h后,显著促进CD11c MHCII 双阳性细胞的比率,在浓度(0～50μg/ml)范围内呈现剂量依赖性,当浓度高于50μg/ml时,双阳性细胞表达率呈现降低趋势。经多糖作用后吞噬FITC-dextran的能力降低,其中PS3的作用效果最明显,表达PE-CD11c×FITC-dextran的细胞比率只有11.53%。结论:车前子多糖促进CD11c MHCII 双阳性细胞的比率,降低对FITC-dextran的吞噬能力,初步表明车前子多糖可以促进树突状细胞的成熟。     

茶叶糖蛋白调控树突状细胞对T淋巴细胞增殖和CTL活性的影响

为探讨茶叶糖蛋白(TGP)对小鼠骨髓来源树突状细胞(DCs)表型及功能的影响,采用细胞因子诱导法,以贴壁法获得贴壁单核细胞,添加重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组白细胞介素-4(rmIL-4)进行体外诱导培养,倒置显微镜动态观察细胞形态的变化;采用流式细胞术检测DCs的表面标志CD11c和MHC Ⅱ类分子表达;采用MTT法检测TGP对DCs刺激OVA未致敏或致敏淋巴细胞增殖的影响;初步探讨TGP对DCs抗小鼠SP2/0骨髓瘤功能的影响.结果表明,经TGP作用48h后,树突状细胞形态更加典型、成熟;与阴性对照相比,TGP显著促进树突状细胞表面CD11c和MHC Ⅱ的表达;TGP可增强DCs的刺激致敏淋巴细胞增殖的能力,说明DCs诱导免疫应答及抗原提呈功能均增强;与未经抗原负载相比,TGP抗肿瘤机制与促进DCs抗原呈递能力有密切的关系,可提高机体对肿瘤细胞的特异性主动免疫功能,而TGP的干预可促进这一功能的提高.茶叶糖蛋白可以促进树突状细胞表型及功能的成熟.