Pyrococcus yayanosii L-天冬酰胺酶在枯草芽孢杆菌中分泌途径的鉴定及其分泌能力的提高

食品安全（GRAS）菌株枯草芽孢杆菌由于其具有良好的分泌表达能力及易于基因工程操作等特性被广泛用作外源蛋白质的表达菌株。枯草芽孢杆菌中蛋白质的分泌大多依赖于信号肽介导的Sec分泌途径（General secretion pathway）和Tat分泌途径（Twin-arginine translocation pathway）。在本研究中，通过信号肽预测、蛋白质N端测序等手段发现来自于Pyrococcus yayanosii L-天冬酰胺酶在枯草芽孢杆菌中的分泌并不依赖信号肽，该酶通过非经典蛋白质分泌途径（non-classical protein secretion pathway）进行分泌。通过信号肽筛选，发现最适合该酶在枯草芽孢杆菌中表达的信号肽为Tat分泌途径信号肽SP_phoD，并通过共表达分子伴侣PrsA的方式将该L-天冬酰胺酶的分泌量提高了72.11%。     

耐盐性谷氨酰胺酶在Bacillus subtilis 168中的整合表达

微生物质粒过表达外源基因,会由于质粒分离稳定性低、种子培养基中需添加抗生素等原因,限制其在工业生产中的应用。为了得到一株可用于工业生产谷氨酰胺酶的菌株,选择食品安全级Bacillus subtilis 168作为宿主,将来源于Micrococcus luteus K-3的编码耐高浓度盐的谷氨酰胺酶基因(Mglu)插入到其染色体上进行整合表达。选择了2个内源性蛋白酶基因作为整合表达位点,通过lox序列的重组消除抗性基因,得到无抗性基因的重组谷氨酰胺酶表达菌株。遗传稳定性研究表明,在不添加抗生素的条件下,通过连续传代重组菌株并测定发酵酶活,发现重组菌株连续传42代时,酶活基本不变。随后,采用5 L发酵罐对重组菌株进行分批补料发酵,最高酶活达到了41.5 U/mL。本研究对提高谷氨酰胺酶重组菌株遗传稳定性提供了借鉴。     

浅谈竹材在室内设计中的应用

随着人们对居住环境和生活品质要求的不断提高,绿色环保和健康成为现代室内环境设计亟待解决的焦点问题。文章以竹材为研究对象,对其在室内设计中的应用展开深入研究。首先,通过对竹材本身属性和价值的挖掘,探讨了竹材的优势和潜在价值;其次,对其在室内环境设计中的可应用形式进行了挖掘;最后,通过对现有应用实例的解析,进一步论证其新的开发和应用方式的可行性。研究借助三个方面的探讨,以期为竹材的开发和利用提供一点可供参考的实践指导。     

重组大肠杆菌表达17β-羟基类固醇脱氢酶全细胞催化合成宝丹酮的研究

宝丹酮作为一种重要的蛋白同化雄性激素类固醇，具有提升肌肉质量和耐力的功能。宝丹酮的传统合成方法是以1,4-雄烯二酮（ADD）为底物通过化学法合成，但过程复杂、污染严重。17β-羟基类固醇脱氢酶（17β-HSD）可催化甾体化合物C-17位点的氧化还原反应，实现ADD和宝丹酮的相互转化。本研究通过基因序列同源性分析，筛选到6种不同来源的17β-HSD基因并对其在大肠杆菌中进行异源表达。利用不同重组菌转化ADD合成宝丹酮，结果表明重组菌BL21/pET28a-HSDPy的ADD转化率最高，因此选择BL21/pET28a-HSDPy进行进一步研究。鉴定了重组菌的酶学性质并优化其全细胞转化条件。结果表明在生物量为36 g·L^-1、底物浓度为5.40 g·L^-1条件下，经过两次补料，获得了3.66 g·L^-1宝丹酮，比优化前提高了4.1倍。而且在生物转化过程中未检测到副产物。为生物合成宝丹酮提供了可能。     

平原地区500kV输电线路电磁环境影响分析

500kV高压输变电工程日益增多,公众对其产生的电磁环境影响也越来越关注。以平原地区河南境内14个500kV高压输变电工程为例,研究同塔双回线路不同架线高度与线路不同距离时,衰减断面和周边民房等建筑处产生的工频电场强度、工频磁感应强度、无线电干扰、噪声等环境影响变化问题,为电磁环境污染防治提供数据和参考。     

行业政策调整下煤炭类上市公司盈余管理实证研究

通过理论和实证分析煤炭上市公司的盈余管理,并结合行业政策调整的实际情况,选取21家煤炭类上市公司为样本,根据样本公司2011-2016年的年报数据分析盈余管理的存在性。采用总体应计利润法,运用扩展后修正的琼斯模型计算可操纵性应计利润,研究结果表明管理层当局有进行正向盈余管理的行为,且存在程度上的差异。     

理性设计定点突变提高Streptomyces kathirae SC-1酪氨酸酶热稳定性

利用SWISS-MODEL在线服务器以栗色浑圆链霉菌(Streptomyces castaneoglobisporus)酪氨酸酶(PDB登录号:2AHL)为模板对S.kathirae酪氨酸酶的3-D结构进行同源模拟。使用在线预测软件PoPMuSiC-2.1计算酪氨酸酶每个突变氨基酸的去折叠自由能变化(ΔΔG)来辅助设计提高酪氨酸酶的稳定性,利用定点突变构建突变体,并且在大肠杆菌中对野生型酪氨酸酶及突变体进行表达,最终获得了两个热稳定性提高的突变体R95Y、G123W。在此基础上进行复合突变,获得了一个热稳定性显著提高的突变体R95Y/G123W。该突变体在60℃的半衰期提高了2.43倍,最适反应温度由45℃提高到50℃,本研究所用的基于蛋白质结构的理性设计提高稳定性的策略也可以应用于其他工业酶类,显示了良好的应用前景。     

优质香醅薄层窜蒸法提高浓香型大曲酒的质量

一、目的优质香醅中酸、酯、醇类成份较高,特别是主体香己酸乙酯含量多,通过薄层窜蒸,利用普通醅中的乙醇来提取香醅中的酸、酯、醇类等香味成份,以提高优质酒产出率和大曲酒质量.     

环己醇装置陶瓷滤芯破裂原因分析及对策

针对环己醇装置水合催化剂再生过滤器陶瓷滤芯破裂的原因进行分析，指出温差大是导致陶瓷滤芯破裂的主要原因，并提出在实际生产中采取的预防措施。措施实施后，延长了陶瓷滤芯的更换周期，节约了资金。     

吐哈油田防漏工艺技术

介绍了吐哈油田防漏工艺技术,该技术是针对吐哈井漏特点和原因以及几年来防漏堵漏的实践而研究摸索出的一整套技术。它包括加FC提高地层耐压能力,合理降低泥浆密度,改善泥浆流变性为主的防漏工艺技术和以随钻、胶凝、桥塞法为主的堵漏工艺技术。该技术在现场应用中取得良好的效果和显著的经济效益。特别是在1991年全面推广应用后效果更为显著,万米漏失率由1990年的4.8次/万m下降到2.20次/万m,堵漏一次成功率由89.7％提高到92.5％。