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目的:建立实时荧光定量PCR检测长链非编码RNA HULC的方法,探讨其在作为肝癌标志的应用价值.方法:根据Genebank中的HULC lncRNA(AY914050.1)全序列,设计HULC基因的特异引物,构建HULC基因的T克隆载体,命名为pMD18-T-HULC;以pMD18-T-HULC为实时荧光定量PCR检测HULC的标准品,建立实时荧光定量PCR检测HULC的方法并进行方法学评价.应用此方法检测8种肿瘤细胞株、肝癌组织、其它癌及癌旁组织中HULC lncRNA的表达.结果:HULC实时荧光定量PCR检测方法学的最低检测限为1.8× 103拷贝/L,线性范围为1.8× 103拷贝/L至4.6× 109拷贝/L;该法的批内变异系数(CV)<2.0%,批间CV< 8.0%.其在肝癌组织和肝癌细胞株起始表达量为(7.6±3.1)×105拷贝/L至(5.6±3.2)×106拷贝/L,明显高于其它癌和癌旁组织HULC lncRNA表达量(<1.8×103拷贝/L).新发现膀胱癌细胞株T24中表达量高[(6.7±2.4)×105拷贝/L],但在膀胱癌组织中表达低(<1.8×103拷贝/L).结论:成功建立了实时荧光定量PCR检测HULC lncRNA的方法,HULC lcRNA可望作为肝癌的标志.  相似文献   
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3.
目的:构建YB1-GST表达系统,建立经济高效YB-1蛋白制备方法并制备其多抗。方法:将YB-1编码序列亚克隆至表达载体pGEX-6P-1;转化表达菌并确定可溶性表达最佳条件;采用GST亲和层析与层析柱上PSP酶切融合蛋白获取无标签蛋白的YB-1,经超滤浓缩及Western blot鉴定后,进-步真空冷冻于燥,制备YB...  相似文献   
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