激光微束穿刺法获得抗虫转基因油菜及其后代的研究

利用激光微束穿刺法将苏云金芽孢杆菌的毒蛋白 (δ endotoxin)基因导入了油菜 ,经聚合酶催化链式反应(PCR)和PCRSouthern杂交证明抗虫基因已导入油菜基因组中并能在T1 代得到遗传。对转基因植株进行了抗虫性测试 ,结果表明某些植株具有较好的抗虫性 ,并且这种抗虫性在T1 代仍能保持。实验结果表明抗虫基因已整合进油菜基因组并得到了稳定的遗传。     

油菜叶绿体定点转化载体的构建及其杀虫性

首先从油菜叶绿体基因组克隆得到包含ｒｐｓ７基因在内的１．０ｋｂＤＮＡ片 包含ｎｄｈＢ基因在内的２．４ｋｂＤＮＡ片段,同时从苏云芽孢杆菌质粒上克隆得到一个全长３．５ｋｂ的ＢＴ杀虫蛋白基因ｃｒｙ１Ａａ。然后以ｒｐｓ７和ｎｄｈＢ基因作为同源重组片段,成功构建了包含Ｂｔ杀虫蛋白和ａａｄＡ抗壮观霉素基因的油菜叶绿体定点转化载体,并对克隆菌体总蛋白进行了生物杀虫试验。结果表明,Ｂｔ杀虫蛋白基因能够得到表达,并     

两段杨树叶绿体DNA片段的克隆及叶绿体定点转化载体的构建

利用PCR方法，从毛白杨（Populus tomentosa C.）叶绿体基因组中克隆了1．7kb和1．6kb的相邻DNA片段，对其进行序列分析表明，扩增片段分别具有1766个和1601个核苷酸，前者包括3′rps12，rps7基因的编码区及其边界序列，后者包含ndhB基因的第一外显子和内含子。本文还构建了杨树这两个片段的限制酶切图谱，并以这两个相邻片段为同源重组片段，分别将绿色荧光蛋白（GFP）基因和苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白（Bt）基因，及其原核表达框插入其间，构建了杨树叶绿体定点转化载体pPZG和pPZB。这两个特异性载体将定位整合到杨树叶绿体基因组中反向重复区的rps7和ndhB基因的间隔区，并高效表达GFP和Bt基因。迄今为止，本文所报道的内容在国内、外尚属首次。