灭活病毒诱导牙鲆传代细胞差减cDNA文库的构建及分析

以灭活大鳞鲆弹状病毒诱导的牙鲆(Paralichthys olivaceus)传代细胞作为检测子(tester),正常对照细胞作为驱赶子(driver),分别提取mRNA,逆转录合成双链cDNA。经两轮差减杂交,两轮抑制性PCR扩增后,取正向差减的PCR产物与T载体连接,构建抑制差减cDNA文库,随机挑取7400余个克隆,对其中4200多个克隆进行PCR扩增鉴定,发现近4000个克隆中均含有插入片段,大小在250～1000bps之间,进一步对含有插入片段的近4000个克隆进行了斑点杂交筛选,得到近668个可能含有抗病毒或与免疫相关的阳性克隆。初步的结果表明所建立的差减cDNA文库适合进一步克隆鱼类抗病毒相关新基因。     

稻渔综合种养及其发展建议

稻田养鱼是一种传统的综合养鱼方式。近几年来,一批以特种经济品种为主导的稻渔综合种养新模式不断涌现,在经济、社会、生态等方面取得显著的成效。为了推广稻渔综合种养的经验,本文实地调研了湖北省两种典型的稻渔综合种养模式,其中"虾–稻共作"模式亩均纯收入超过3 000元,亩纯收入则是单纯种粮的3~4倍;"鳖–虾–鱼–稻共作"模式亩均纯收入近万元,是单一种植水稻亩均效益的12.8倍。本文还提出了加快产业发展的建议,包括进一步拓展种养殖空间、促进产业融合发展及加大政策扶持力度等。     

斜带石斑鱼生长催乳素基因全长cDNA的克隆、表达及其免疫荧光分析

我们从斜带石斑鱼垂体的SMART cDNA质粒文库中筛选到生长催乳素基因(so-matolactin,SL)的全长cDNA片段,其编码区为1644bp,编码231个氨基酸,其中N-端的24个氨基酸肽段为信号肽。运用RT-PCR技术考察了其在石斑鱼不同组织中的mRNA的转录水平,结果表明,该基因在垂体中大量转录,在其他组织中几乎检测不到转录本的存在。选取基因开放阅读框的核苷酸序列插入pGEX-KG载体进行原核表达,在大肠杆菌中表达的融合蛋白的分子量约为50kDa,并以表达的产物为抗原免疫家兔制备了多克隆抗体。采用冰冻切片和FITC标记的荧光染色方法将SL基因初步定位于脑垂体中部,沿着神经组织边缘分布。本研究为深入研究石斑鱼的生长激素／催乳激素家族的进化关系及SL基因的功能奠定了基础。     

雌核发育银鲫四种孵化酶基因全长cDNA的克隆及其特征分析

用抑制性差减杂交结合SMART cDNA合成和RACE-PCR技术，克隆得到雌核发育银鲫(Carassius auratus gibelio)4种孵化酶基因的全长eDNA。4种孵化酶基因分别被命名为GHEl、GHE2、GHE3、GHE4。序列分析表明，4种孵化酶基因cDNA的开放阅读框均为795bp，都编码265个氨基酸。它们推断的编码氨基酸序列同源性在79．6～95．1％之间。种系分析表明，GHEl、GHE2、GHE3、GHE4的进化地位位于日本鳗鲡(Anguilla japonica)孵化酶和青鳉(Oryzias latipes)孵化酶之间。不同发育时期胚胎的RT-PCR分析表明，银鲫GHEl、GHE2、GHE3、GHE4 4种孵化酶基因从尾芽期到幼苗期都检测到表达，且GHE3和GHE4在神经胚期也检测到表达。各种组织的RT-PCR表明，它们在成鱼组织中不表达。     

斜带石斑鱼sox3基因cDNA的克隆及其时空表达特征分析

采用RACE-PCR方法从斜带石斑鱼的下丘脑SMART cDNA中克隆sox3基因，并研究其时空表达模式。研究结果表明，sox3 cDNA片段全长1152bp，共编码300个氨基酸。该基因在未受精卵和桑椹胚期仅可检测到微弱的转录本，从高囊胚期开始转录，一直到鱼苗1天，都维持着较高的表达水平。在肝和肾等6种组织中均检测不到转录本的存在，而在包括垂体和下丘脑等6种脑组织中可检测到不同强弱的转录本，呈现出很强的中枢神经系统的表达特异性。在未成熟卵巢中可检测到大量转录本的存在，在成熟卵子中可检测到微弱的转录本，而在处于变性期的性腺中检测不到转录本的存在，呈现出很强的雌性性腺特异性。由此我们推断，sox3基因在石斑鱼的中枢神经系统发育和卵子发生过程中起了重要作用。     

水产遗传育种与水产种业发展战略研究

20多年来,随着水生生物学和生物技术的发展,我国在水产遗传育种与种业方面取得了诸多进展,但也面临着机遇和挑战。本文围绕种质资源保存与利用、遗传机制解析与功能基因挖掘、优良性状新品种选育、水产种业建设等,开展国内外遗传育种现状对比分析研究,分析了当前存在的一些问题,提出未来特别是"十三五"期间水产遗传育种科技发展目标和重点任务。