鸭疫里默氏杆菌Ⅰ型磷酸二酯酶基因的发现及其分子特征分析

以兔抗鸭疫里默氏杆菌（RA）阳性血清对RA血清1型CH-1株表达型DNA文库中已通过蓝白斑筛选的一个阳性克隆进行了原位杂交筛选。经过5次免疫筛选后,阳性斑经过体内删除,噬菌粒经酶切分析和序列测定,得到一段4434bp的插入DNA片段。运用NCBI的BLASTN、BLASTP、ORF Finder、Conserved Domains、EMBL的FASTA等程序对该片段中的一个命名为ORF1689的开放阅读框架进行了全面的生物信息学分析。结果显示ORF1689起始密码子上游存在核糖体结合位点,完整ORF含1689bp,编码562个氨基酸,其编码蛋白的理论分子量为59．5kD,等电点为5．82。0RF1689具有phosphodiest蛋白家族的保守区域,与丙杆菌属的Caulobacter sp．K31、鞘氨醇单胞菌（Sphingomonas sp．）、Sphingopyxis alaskensis和Novosphingobium aromaticivorans的Ⅰ型磷酸二酯酶基因的氨基酸序列同源性分别为49．283％、38．716％、38．693％和38．313％,表明该基因是一种新的Ⅰ型磷酸二酯酶基因。该研究结果对阐明Ⅰ型磷酸二酯酶的生物学功能和RA的生理特性与致病机理提供了理论基础和实验数据。     

猪繁殖与呼吸综合征的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的，以成年母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为主要症状的猪主要传染病之一。本病20世纪80年代首次发现于美国．当时被称为“猪的神秘病”。此后，加拿大(1987)、德国(1990)、西班     

肠炎沙门氏菌种特异性FQ-PCR快速检测方法的建立

根据肠炎沙门氏茵(SE)种特异性DNA序列,设计合成了一对能特异性扩增130bp片段的引物和TaqMan探针,首次建立了SE的种特异性荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)诊断方法.该法在SE DNA含量为9×10 8～9×10 4拷贝有较好的线性关系;检测SE DNA模板的灵敏度为4拷贝/μL,检测SE细菌数的灵敏度为6 CFU/mL;特异性试验表明只对SE基因组呈阳性反应.分别应用该技术和传统细菌分离法检测60份来自人工感染鸭、小白鼠和肉兔的心、肝、脑和直肠粪便,结果显示两种方法对心、肝、直肠粪便的阳性检测结果符合率为100%,而FQ-PCR对脑的阳性检测率极显著(P＜0.01)高于细菌分离.研究结果表明,该方法快速、灵敏、特异、重复性好且能实时定量检测,可用于SE分离鉴定、SE感染疑似病例检测、SE体内动态分布规律研究及其分子流行病学调查.     

基因枪轰击小鹅瘟病毒VP3基因疫苗诱导鹅体内体液免疫的机制

将小鹅瘟病毒VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别以每只1μg、3μg和6μg的基因枪轰击免疫30日龄四川白鹅,用免疫组织化学法检测pcDNA-GPV-VP3在鹅体内各组织器官表达情况;用间接ELISA检测免疫鹅血清中GPV抗体滴度.结果:①各剂量免疫组1d时能在免疫部位皮肤,3d时能在心脏/十二指肠/空肠/盲肠/肝脏,7d时在回肠/直肠检测到pcDNA-GPV-VP3的表达;7d表达最多;表达可持续至35～63d;表达产物的数量和表达持续时间总体规律为6μg组＞3μg组＞1μg组.②免疫后第7d血清抗体开始升高,21d达到最大值,免疫后第14～217d极显著(P<0.01)高于PBS和空白质粒对照;体液免疫效果存在一定的剂量依赖.研究表明,pcDNA-GPV-VP3基因枪轰击免疫雏鹅后能在免疫部位皮肤、心肌、肝脏和各肠段中表达并能够诱导雏鹅产生良好的体液免疫.     

小鹅瘟病毒VP3基因疫苗的构建及其诱导小鼠和鹅中和抗体的初报

PCR扩增小鹅瘟病毒（GPV）CHv株VP3基因并克隆入pMD 18-T-Simple载体,亚克隆正向插入到真核表达质粒pcDNA3．1（＋）CMV启动子下游多克隆位点,经PCR和Hind与Bandt I双酶切鉴定表明成功构建了GPVVP3基因疫苗（pcDNA3．1．GPV—VP3）。该疫苗以200μg/只肌注免疫Balb／c小鼠和鹅,同时分别设肌注PBS和pcDNA3．1（＋）作为对照,于免疫后第30、45、60、75、90、105天应用鸭胚原代成纤维细胞（DEF）进行微量中和试验检测小鼠和鹅血清抗100TCID50GPV的抗体效价。结果表明,pcDNA3．1-GPV-VP3免疫小鼠第30天可检测到抗GPV的中和抗体,抗体效价缓慢上升至90天达到高峰（平均1：135．8）后下降,105天仍高于75天;免疫鹅的中和抗体效价呈现与小鼠类似的规律,第90天达到高峰（平均1：98．5）。因此,pcDNA3．1-GPV-VV3具有良好的免疫原性,肌注免疫小鼠和鹅后能够诱发产生抗GPV的中和抗体,有进一步开展临床研究和应用的前景。     

鸭瘟病毒dUTPase基因的分子特性及转录时相分析

应用大量生物信息学分析工具及RNA斑点杂交技术对本实验室构建鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)CHv株基因文库时新发现的dUTPase基因(GenBank登录号DQ486149)进行了分子特性及转录时相分析.研究表明:该基因大小为 1344bp,编码447个氨基酸,包含dUTPase家族蛋白的5个保守motifs,排列形式3-1-2-4-5具备Ⅱ型dUTPase的典型特征.DPV CHv dUTPase基因在25个疱疹病毒参考株之间高度保守,并与α疱疹病毒的氨基酸同源性较之与β、γ疱疹病毒要高.DPV CHv dUTPase基因转录检测发现DPV感染宿主细胞后最早30min可检测到该基因转录产物,随后转录产物量迅速放大,4h达高峰,24h后下降至相对低的水平.该研究为阐明病毒基因表达调控机理提供了有用的实验数据,并对病毒其他基因的发现和研究具有指导性意义.