电转化法转化钝顶螺旋藻转化条件的研究

确定了电转化法转化钝项螺旋藻S6-4的转化条件。无论受体是藻丝还是单细胞／藻丝段，钝项螺旋藻S6-4在对数生长期内，半致死电场强度无显著差别。实验表明以对数中期的螺旋藻用于转化为宜。当脉冲时间是5．0ms时，藻丝受体和单细胞／藻丝段受体的半致死电场强度分别是3．75—5．0kV／cm和3．1—4．4kV／cm，而电击缓冲液分别是1．0mmol／L HEPES(pH7．5)缓冲液和含有0．5mol／L蔗糖的1．0mmol／L HEP—ES(pH7．5)缓冲液。本文的研究结果为螺旋藻转化及外源基因表达提供了实验基础。     

极大节旋藻(Arthrospira maxima)生物钟基因kaiC的克隆及分析

以kaiC基因簇部分已知序列为引物设计位点,采用PCR反应池法从节旋藻基因组fosmid文库中筛选到kaiC基因克隆,通过步移测序获得了kaiC基因全长序列。kaiC基因编码区长1554bo,基因GC碱基含量平均为41．76％,密码子第三位明显偏向于U。在基因上游385bp范围内发现一个可能的启动子序列和一些基因调控元件。KaiC蛋白分析发现了Walker A、DXXG、不完整的Walker B等重要模体和具有催化作用的功能位点。Southem杂交的结果证明kaiC基因在极大节旋藻中为单拷贝。极大节旋藻kaiC基因的特殊结构特征为研究kai基因簇的进化提供了重要的启示。     

几种江蓠属海藻的ISSR标记分析

用ISSR标记对几种江蓠属海藻进行了遗传多样性的研究。所用的7种实验材料包括4株龙须菜(其中3株分别来自中国青岛、委内瑞拉和南非，及1株青岛产龙须菜的高温选育种)和细基江蓠繁枝变型、真江蓠、芋根江蓠。用9条ISSR引物进行筛选，有6条可扩增出清晰可辨条带。这6条引物在7种材料中共扩增出151条带，其中117条(77．48％)表现出多态性。根据Nei等的遗传相似性系数(S)对7种材料进行分析，结果显示青岛产龙须菜与其选育种的相似性最高(S为0．939)。在3株不同产地龙须菜中，青岛龙须菜与南非龙须菜的遗传距离最近(S为0．643)，委内瑞拉龙须菜与前两者的S分别为0．167和0．192，因此初步推断委内瑞拉龙须菜不属于龙须菜种。包括龙须菜(产自青岛或南非)在内的4种江蓠间的相似性系数在0～0．143之间。     

条斑紫菜赤腐病的病原学研究

条斑紫菜是红藻门的代表性物种之一,具有重要的经济价值。但近年来,随着条斑紫菜栽培规模的持续扩大,病害发生的频率、规模和危害程度也逐年增加。本研究对紫菜腐霉的生长特性进行研究,发现其在温度28℃,盐度为20‰时生长速度最快。此外,对感染的叶片进行了病原学的研究。对条斑紫菜病害进行病原学和致病条件的研究,不仅可以为制定病害防治措施提供依据,而且也将为抗病品系的筛选提供条件。     

cpcB与CT融合蛋白表达质粒在大肠杆菌中的表达和纯化

将人和鲑鱼嵌合型降钙素基因与藻蓝蛋白的β亚基基因相连,插入融合表达载体pGEX-4T-3中,转化大肠杆菌BL21。融合蛋白cpcB-CT基因在IPTG诱导下获得高效表达。超声破碎后,经SDS-PAGE分析,在48kD处有新增条,灰度扫描测定,过表达蛋白量占50％～60％,85％为包涵体。包涵体经变性、复性,过Glutathion-Sepharose-4B亲和吸附柱,获含有GST。的融合蛋白,该蛋白经凝血酶消化和截留分离,获得纯化的融合蛋白cpcBCT。Western blotting分析表明,产物具有与合成人降钙素相似的抗原决定簇部分;ELISA-受体法和大鼠降血钙试验表明,其具有降血钙作用。提示该融合蛋白可能具有良好的应用前景。     

牙鲆生长激素基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从牙鲆(Paralichthys olivaceus)脑垂体总RNA中扩增出编码牙鲆生长素(GH)成熟肽基因序列。重组至融合表达载体pGEX-4T-3中,构建成牙鲆GH基因融合表达载体pGEX-gh,转化大肠杆菌BL21(DF3),筛选阳性克隆,IVIG诱导表达。经SDS-PAGE电泳显示在45kD处有特异的蛋白条带出现,该蛋白的表达量随诱导时间的延长而增加,3h达最高值,达到细胞总蛋白的18．3％。该融合蛋白在胞内主要以包涵体状态存在,经优化表达条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,经Glutathione Sepharase 4B凝胶纯化后用Western-blotting检测表明其为牙鲆生长激素,并通过酶联免疫吸附受体法证实其具有生物学活性。     

丛粒藻Abt02光饱和点的测定

本文利用微呼吸仪测定了丛粒藻Abt 02在不同光照强度下的光合速率，确定了丛粒藻Abt02适宜生长的光照强度范围以及其光饱和点。为后续筛选耐高光丛粒藻藻株奠定基础。     

节旋藻FACHB341 Rubisco基因部分序列的克隆和分析

以节旋藻FACHB34l为材料，对所克隆Rubisco基因进行了核苷酸序列测定和分析，由此推导出相应的氨基酸序列，并与部分其他蓝藻的同源基因进行了同源性分析。结果表明：所克隆DNA片段包含Rubisco大小亚基基因部分序列及rbcX基因序列，长度为2073bp，其中rbcL和rbcX基因之间存在两个转录茎环结构；大小亚基酸性氨基酸和碱性氨基酸的比例分别为13．14％和14．51％，疏水氨基酸的比例为42．16％；rbcL核苷酸序列与集胞藻PCC6803、Prochlorothrix hallandica、聚球藻PCC630l、Agmenellum quadruplicatum和鱼腥藻PCC7120同源序列的相似性分别为91．7％、79．9％、74．8％、77．2％和76．1％；rbcS核苷酸序列与鱼腥藻PCC7120同源序列的相似性为67．6％，而与PCC630l和集胞藻PCC7002同源序列的相似性分别为30．1％和63．8％。     

山东潮问带刚毛藻DNA条形码鉴定技术

DNA条形码在分类鉴定方面较有效的技术。因此,我们将山东潮间带和福建莆田潮间带地区采集的22株刚毛藻目样品在形态分类的基础上采用18S、ITS和LSU三个基因进行鉴定。结果表明,ITS基因是鉴定刚毛藻目形态相似物种的有效分子标记,而LSU和18s基因对属和属以上水平的物种鉴定较为有效。此外,我们通过形态和分子鉴定结合,共鉴定出9个物种,分别是气生硬毛藻、线性硬毛藻、强壮硬毛藻、辽东硬毛藻、短节硬毛藻、扇形刚毛藻、沙生刚毛藻、苍白刚毛藻、小枝刚毛藻、岸生根枝藻。     

esaC基因对迟缓爱德华氏菌的毒力及T3SS蛋白分泌的影响

为了确定编码迟缓爱德华氏菌(E.tarda)Ⅲ型分泌系统(T3SS)装置蛋白的esaC基因的功能,采用基因敲除的方法构建了E.tarda野生型致病菌株LSFAO的esaC基因无极性缺失突变株LSE40ΔesaC,该突变株缺失了esaC的46-1452bp。Western blotting分析表明,由于esaC的缺失,E.tarda T3SS的输送器蛋白(EseB,EseC,EseD)不能分泌到细胞外,同时细菌的自凝聚现象消失;毒力检测发现,突变株LSE40ΔesaC对蓝曼龙鱼的半数致死量比野生型菌株提高了11.5倍。结果表明,esaC基因影响T3SS输送器蛋白的分泌和E.tarda的毒力。此研究确定了esaC基因作为E.tarda T3SS装置蛋白的功能,加深了对E.tarda致病机理的了解。