鞘氨醇单胞菌降解多环芳烃菲过程中菌体全蛋白提取方法的优化及其蛋白的差异表达

采用平板升华技术从厦门博坦油码头表层海水样品中筛选获得一株高效降解多环芳烃(PAHs)的菌,经16S rDNA分子鉴定,该菌株归属鞘氨醇单胞菌属,定名为Sphin-gomonassp.strain H。Strain H在24h内对初始浓度为50mg/L的多环芳烃菲的降解率可达94%。以strain H为模式菌株,对其在降解过程中菌体全蛋白的提取进行了优化,以获得高质量的降解全程各个阶段具有代表性的菌体蛋白样品。结果表明,超声-三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀的方法可有效去除中间代谢产物的干扰,获得纯度较高的蛋白样品。对以此方法提取的蛋白样品,通过双向电泳技术比较了strain H在有和没有菲诱导条件下的蛋白质表达差异,获得17个差异蛋白点。这些差异蛋白点的获得将为进一步分析参与PAHs降解的关键酶系和探索菲的代谢途径奠定实验基础。     

海洋沉积物中磷脂类化合物中脂肪酸的GC-MS分析

应用GC-MS技术对海洋沉积物中磷脂类化合物的脂肪酸进行了分析，鉴定出70种脂肪酸，建立了磷脂类化合物中脂肪酸的GC-MS测定方法。加标脂肪酸系列化合物回收率为72.8%～91.5%。探讨了用炮脂类化合物估价海洋和河口沉积物中微生物生物量的可行性。     

包埋固定化CK3脱色菌对偶氮染料Reactive Red 180的脱色特性

采用改进的PVA-硼酸包埋法固定化CK3脱色菌,以偶氮染料CIReactivc Red 180为处理对象,采用批式工艺在缺氧条件下,系统考察了原水pH、外加碳源、盐度等因子对固定化CK3脱色菌脱色特性的影响,同时通过试验现象分析了不同进水条件下固定化凝胶小球强度的变化.蛄果表明,进水pH为碱性时脱色效果最好,但小球强度较差,向水中引入了大量有机物质,使废水中COD显著增大,进水pH为酸性时,有利于保持凝胶小球的强度,但脱色效果不如碱性条件;固定化CK3脱色菌对以葡萄糖为外加碳源的染料废水的脱色效果较好,在进水不合葡萄糖时小球强度严重降低,且脱色效果较差;染料废水中Nacl浓度在0.5～15 g·L-1范围内,均有较好的脱色效果.     

海洋沉积物DNA提取前的简易脱腐方法研究

针对海洋沉积环境样品DNA提取中的腐殖酸去除难题,采取先脱除腐殖酸再提取DNA的策略,进行了海洋沉积物DNA提取前的简易脱腐方法研究.依据腐殖酸的理化性质, 遴选出由Tris-HCl、EDTA、Na4P2O7、NaCl、PVP、Triton X-100及脱脂奶粉组成脱腐缓冲液,有效地脱除了腐殖酸.之后采用温和的溶菌酶-蛋白酶K-SDS直接裂解法,获取了大片段(分子量21kb以上)可进行rpoB 基因PCR扩增的海洋沉积物DNA,为海洋沉积环境分子生态学研究与海洋生物活性物质开发奠定了基础.     

基于分子技术的1株产毒藻藻际细菌多样性分析

采用构建16S rDNA克隆文库的方法,对实验室保存的1株产毒塔玛亚历山大藻在不同时期的藻际细菌群落多样性进行了分析.限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)结果表明,塔玛亚历山大藻藻际微生物的16S rDNA克隆文库中的克隆子总共可分为 34 种基因型,选取各谱型的代表克隆子测定其16S rDNA片段核苷酸序列,将所获得的序列与GenBank数据库进行BLAST比对,结果表明所有基因型分属于2个细菌类群：变形细菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes).在延滞期的藻培养液中,α-Proteobacteria占36.4%,β-Proteobacteria占9.1%,γ-Proteobacteria占27.3%,拟杆菌门(Bacteroidetes)占27.3%;在指数后期的培养液中,α-Proteobacteria占53.3%,β-Proteobacteria占13.3%,γ-Proteobacteria占6.7%,拟杆菌门(Bacteroidetes)占26.7%; 在稳定期的培养液中,α-Proteobacteria占47.8%,β-Proteobacteria占8.7%,γ-Proteobacteria占21.7%,δ-Proteobacteria占4.3%,拟杆菌门(Bacteroidetes)占17.4%;其中有不少克隆子与已知序列同源性低于 94%,表明塔玛亚历山大藻藻际环境中附着有新的未开发的微生物资源,这些细菌可能在微藻的生消过程中起着重要的调控作用,所以本研究结果在赤潮微生物调控中具有重要的理论意义和应用价值.