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1.
为提高Western Blotting结果的可靠性,以蛋白溶出率和凝胶电泳蛋白条带完整性为指标,比较提取液种类、研磨方式、酶抑制剂种类及其体积分数和提取时间对南美白对虾肝胰腺蛋白提取效果的影响。采用优化后的提取方法获得高质量蛋白样品,并采用Western Blotting法分析无水环境胁迫后南美白对虾肝胰腺组织中细胞凋亡信号通路相关蛋白的表达水平。结果表明:RIPA裂解液作为提取溶剂所得的蛋白溶出率高于水提和磷酸盐缓冲液,电动匀浆和液氮研磨所得蛋白条带更完整,4%蛋白酶磷酸酶混合抑制剂能有效抑制肝胰腺内源酶引起的蛋白降解;采用Western Blotting法分析无水保活期间南美白对虾肝胰腺蛋白,发现低温诱导休眠的同时会引起细胞轻微凋亡,且凋亡水平呈应激时间依赖性增加,环境胁迫解除后有所回调。 相似文献
2.
3.
为探究T-2毒素对凡纳滨对虾DNA黏度的损伤效应,通过小牛胸腺DNA与T-2毒素作用,采用响应面分析T-2毒素与DNA的最佳作用条件,通过体外T-2毒素与对虾DNA作用验证,以及喂食对虾T-2毒素进行蓄积染毒后,观察其对DNA黏度的影响。结果:响应面分析优化出对DNA黏度影响最明显的反应条件为T-2毒素质量浓度2.70 ng/mL、DNA质量浓度50μg/mL、反应时间43 min;T-2毒素与对虾DNA体外作用,随着T-2毒素质量浓度的增加,DNA黏度随之增大,在T-2毒素质量浓度为2.70 ng/mL时达到最大值,此后降低;喂食对虾T-2毒素进行蓄积染毒对对虾DNA黏度的影响无明确规律,与体外对虾DNA实验结果并不相似。本研究阐明T-2毒素对对虾DNA黏度的影响,对探讨T-2毒素的毒理作用具有一定的意义。 相似文献
4.
为了获得对产毒镰孢菌具有抑制效应的海洋细菌,从对虾肠道中分离细菌,并将分离得到的优势细菌与产T-2毒素的禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)(FG1207)进行固体对峙培养,具有抑菌圈的细菌菌落即为产毒镰孢菌的抑制菌。然后选取对FG1207具有抑制作用的细菌与FG1207进行液体共同培养,用LC-MS/MS技术检测菌悬液中T-2毒素含量,最后对具有抑制FG1207的生长和降解T-2毒素效果的细菌进行16s r RNA序列鉴定和VITEK2细菌生化鉴定。实验结果分离得到8株优势细菌,其中一株对FG1207的生长具有明显的抑制作用;LC-MS/MS检测发现该细菌与FG1207共同培养菌悬液中未检测到T-2毒素,说明该细菌不仅能够抑制产毒镰孢菌的生长,还能降解T-2毒素。经16s r RNA鉴定该细菌为海洋尼泊尔葡萄球菌(Nepal Staphylococcus Aureus),相似度为99.93%,VITEK2细菌生化鉴定的相似度为96.86%。 相似文献
5.
探索凡纳滨对虾在冷藏过程色差值ΔE*与一些典型质量性状的相关程度。将对虾置于4℃冷藏,每隔1d取出对虾,检测典型质量性状:细菌总数(CFU)、挥发盐基氮(TVB-N)含量、多酚氧化酶(PPO)活性、蒸煮损失率、肌肉pH值及对虾的色差值△E*,并将所得数据用灰色关联分析法分析。试验结果显示:△E*与CFU、TVBN含量、PPO活性以及pH值的关联度都大于0.6,而与蒸煮损失率的关联度小于0.6,△E*与这些质量性状的关联度由大到小排序为:PPO活性细菌总数TVB-N含量肌肉pH值蒸煮损失率。试验结果表明:凡纳滨对虾冷藏过程中,PPO活性、细菌总数、TVB-N含量和肌肉pH值都与△E*具有显著的相关关系,其中PPO活性与△E*的相关程度最高,而蒸煮损失率与ΔE*的相关关系不明显。 相似文献
6.
7.
为探明冷藏对虾黑变规律,研究了南美白对虾在为期10 d的冷藏过程中黑变与丝氨酸蛋白酶(serine protease,SP)的活性变化及其相关性。结果表明,南美白对虾感官黑变呈现出先慢后快的特征,前2 d基本无变化,第3 d时变化开始加快,第5 d变化最为显著,第6至第10 d黑变速率差异不显著,第4 d是黑变防控的关键期。进一步定量分析表明对虾不同部位的黑变速率存在显著差异,冷藏至第4 d时头部、腹部和尾部间的明度L值差异开始明显,第5 d时三者之间达到显著性差异(P0.05);统计分析表明对虾冷藏过程中不同部位SP活力与黑变存在显著相关性,头部组织对对SP活力变化最为敏感,其斜率k为0.0312,明显大于尾部的0.0271和腹部的0.0128,是黑变调控的关键部位。本研究证明在冷藏南美白对虾体内也存在酚氧化酶激活系统,SP活力水平同样对酚氧化酶原的激活水平起重要调控作用,其规律和机制有待深入研究。 相似文献
8.
目的:开发新的海鱼干耐高盐优势真菌抑制剂。方法:取用湛江市特呈岛红树林海域的海水、海泥以及红树林的根、茎和叶的样本,利用琼脂扩散法和平板点种法筛选出一株强抗菌活性菌株HY-5,通过传统细胞形态观察并结合生理生化实验及16S r DNA序列进行分析鉴定;利用杯碟法测定上清液对17株霉变海鱼干优势真菌抗菌谱,发酵液酸沉后经LC-MS检测其抗菌成分。结果:HY-5被鉴定为解淀粉芽孢杆菌,其上清液对17株霉变海鱼干优势真菌均有明显抗菌作用;LC-MS检测到HY-5发酵液中含2组抗菌脂肽surfactin(994.6、1008.6、1022.5和1036.6)和iturin(1016.5、1030.5、1044.4和1058.3)组分。结论:海洋源解淀粉芽孢杆菌HY-5的粗提液中含有抗菌脂肽,其对霉变海鱼干优势真菌有较强的拮抗作用。 相似文献
9.
以3 mg/kg bw T-2毒素(T-2)对凡纳滨对虾肌肉注射染毒,于5,10,15,30,45,60,120,240,480,960min和1 440 min时间点采集血淋巴及肝胰腺,采用LC/MS-MS法测定对虾血淋巴中T-2浓度,并测定肝微粒体APND及ERND酶活性。使用代谢动力学3P97软件分析及使用Origin 8.5软件对肝微粒体代谢酶活性曲线拟合,探究T-2对凡纳滨对虾毒代动力学及对代谢酶的影响。结果表明,血淋巴中T-2浓度随时间的延长逐渐降低,其曲线拟合方程式为y=8.8+1587.8×0.96x,R~2=0.721;主要代谢动力学参数为k_(12):0.00 min~(-1);k_(21):9.66×10~(-2)min~(-1);k_(13):5.14×10~(-2)min~(-1);k_(31):1.41×10~(-3)min~(-1);k_(10):4.54×10~(-2)min~(-1);t_(1/2)π:7.10 min;t_(1/2)α:7.17 min;t_(1/2)β:1.06×10~3min;AUC:6.01×10~4ng·min/g;CL(s):5.00×10~(-5)g/min;VC:1.10×10~(-3)(mg/kg)/(ng/g)。对虾肝微粒体中ERND与APND代谢酶活性变化趋势符合毒物刺激效应模型,即在暴露T-2后迅速出现激活效应。经拟合曲线分析,与APND酶活相拟合的函数为Gauss,时间-反应拟合方程式为y=66.8(1-e~(-0.03x))_2~(-0).~(27),R~2=0.752;与ERND酶活相对反应度相拟合的函数为Chapman,时间-反应拟合方程式为:y=89.9+48e-2~((x-9.4)/32.5),R~2=0.995。 相似文献
10.
N-酰基高丝氨酸内酯(AHLs)是副溶血弧菌的群体感应系统的信号分子,参与微生物的毒力调控,目前缺乏准确检测生物被膜中的信号分子的方法。在现有信号分子HPLC-MS/MS检测条件基础上,针对副溶血弧菌生物被膜生成过程中信号分子定性定量检测方法进行优化。结果显示:无水甲醇∶0.1%乙酸铵水为流动相分离效果较优;当选择碰撞能量为10~15 e V时,各信号分子均可形成较高比例的特征碎片离子(m/z)102.1和74.1,并在0~20μg/L范围内均有良好的线性关系(R20.995),采用该法能够检测副溶血性弧菌生物被膜形成过程中产生的C4-HSL、3-oxo-C6-HSL和3-oxo-C14-HSL三种信号分子,其中C4-HSL的量占绝对优势(91.67%)。在生物被膜形成的前期(0.5~3 d),信号分子的浓度缓慢增长,与生物被膜的生成量成正相关;当被膜进入消散期时(4~5 d),信号分子的浓度快速增长,与被膜生成量呈显著负相关。高效液相色谱-串联质谱法的优化有助于更加有效地检出生物被膜中的信号分子,为更好地认识生物被膜与群体感应信号分子间的调控关系提供支撑。 相似文献