重组人淋巴细胞活化基因-3蛋白胞外段的真核表达及鉴定

目的真核表达重组人淋巴细胞活化基因-3(lymphocyte activation gene-3,LAG-3)蛋白胞外段,并进行鉴定。方法用植物血球凝集素(phytohaemagg lutinin,PHA)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测Jurkat细胞中LAG-3蛋白的表达;提取Jurkat细胞总mRNA,RT-PCR法扩增人LAG-3蛋白胞外段基因片段,同时在蛋白C-末端引入His标签,将其克隆入载体pcDNA3. 1+,构建重组质粒,转染Expi293F真核细胞,当细胞活率低于50%时收获细胞上清,经镍柱亲合层析纯化。纯化产物进行4%~20%SDS-PAGE、HPLC及Western blot分析,BCA法测定浓度。结果经菌液PCR、双酶切及测序鉴定,表明质粒构建正确。重组表达蛋白的相对分子质量约60 000,纯化后纯度达95%以上,与鼠抗LAG-3单克隆抗体可发生特异性结合,浓度为2. 4 mg/mL。结论成功构建了重组真核表达质粒LAG-3/pcDNA3. 1+,并于Expi293F细胞中表达,纯化获得了纯度较高的LAG-3蛋白,为后期LAG-3蛋白的相关研究及其单抗的制备奠定了基础。     

大跨度空间钢管桁架拱施工技术

国家体育总局训练局比赛馆屋面承重结构采用大跨度空间钢管桁架拱结构,介绍桁架拱的制作、拼装、滑移和安装等施工工艺以及相应的施工过程分析。     

盾构原位拆解附加荷载对管片结构和围岩的影响研究

文章依托新街台格庙矿区1号矿井的主斜井工程,采用锚索作为围岩的支护手段,基于有限差分软件FLAC3D,建立了加固后的盾构原位拆解数值模型,探究出盾构原位拆解过程中附加荷载对管片结构和围岩的影响。结果表明:(1)盾构拆解过程中附加荷载对围岩的影响主要表现为掌子面上方应力场变化明显,塑性区范围增大;围岩的位移整体变化不是很显著,只在受荷吊点位置处有一定的变化;(2)对盾壳的影响表现为在靠近掌子面的吊点位置,盾壳的位移和最大弯矩均呈现下降趋势;在远离掌子面的位置影响不明显;(3)附加荷载对管片结构的内力和位移结果影响较小,影响范围集中在紧临拆解段的部分结构,规律为随着荷载向后部移动,管片结构中最大弯矩和位移稍微增大。     

微量滴定板上的弹性蛋白酶动态显色法检测α_1-蛋白酶抑制剂活性

目的建立微量滴定板上的弹性蛋白酶动态显色法(以下简称微量滴定板法),用于α1-蛋白酶抑制剂(α1-Pro-teinase inhibitor,α1-PI)的活性检测。方法以微量滴定板为载体,将不同量的α1-PI样品与定量的弹性蛋白酶混合,通过适宜的显色底物对剩余的弹性蛋白酶活性进行测定。用酶标仪测定405 nm处A值的变化,分析试验的有效性,并计算α1-PI样品的活性。优化微量滴定板法的实验条件。用BCS凝集分析仪检测α1-PI的活性,确认样品的工作浓度。采用两种方法检测19份样品的α1-PI活性,分析二者的相关性。结果微量滴定板法的最优实验条件为:样品加样体积50μl,标准曲线范围为(2～14)μg/ml;弹性蛋白酶稀释度为1∶1 400,体积100μl;孵育时间15 min;底物稀释度为1∶10,体积50μl;连续监测A405值10 min。微量滴定板法和BCS法检测19份样品的相关系数大于0.99。结论微量滴定板法检测α1-PI活性的时间更短,同一样品不同稀释度之间检测结果的变异率更低,且检测结果与BCS法相关性良好,可替代全自动的BCS法,降低检测成本。     

轨道车辆水性面漆涂膜弊病的工艺改进及预防控制措施

水性面漆在轨道车辆的应用中经常出现麻点、缩孔、橘皮、厚边、发白、肿胀、起泡等漆膜弊病，本文从环境控制、工艺参数及工艺方法优化、预防控制措施等几个方面分析，进行工艺改进和预防控制，通过在现车上实施得到了有效的改善。     

抽油杆光弹性应力分析

抽油杆主要失效形式是疲劳断裂,因此,必须对抽油杆的结构形状进行研究。作者用光弹性试验,对JB2823-79和API两种规范的7/8＂抽油杆进行了对比,通过两种结构形式的7/8＂抽油杆模拟试验,分析了杆头锻造部分的表面应力分布情况;对5/8＂、3/4＂、7/8＂、1＂和9/8＂五种抽油杆进行了平面光弹试验,分析了扳手方附近的过渡圆角的大小对该部位应力分布的影响;最后又通过四种不同卸荷槽长度的模型试验,分析了卸荷槽长度对公螺纹各牙受载情况的影响。     

防伪纸的防伪技术

防伪纸是一种能防止伪造的纸张。在国外,防伪纸又被称为安全纸(Safety paper)或保密纸(Securitypaper)。最早防伪纸主要用于钞票,目前已经广泛应用于护照、股票、证件、彩票、车票、商标等,它已经成为防伪印刷品的重要物质基础。一、特殊的生产工艺纸张是各种防伪措施的承载体,因此,防伪纸的制造具有特殊的生产工艺。在原料选择上,多选用普通纸不常采用的造纸植物原料或稀有的特种纤维原料(棉花、棉短绒、剪口布和苎麻、亚麻、马尼拉麻等),以保证纸张具有较高的强度和与众不同的手感。日本为了区别于普通纸,配加了稻草浆生产日元用纸,不仅提高了纸张表     

关于二氧化钛的留着率

二氧化钛俗名钛白或钛白粉,是一种高级纸张填料。在自然界有金红石、锐钛矿、板钛矿三种矿石。纸张填料一般选用锐钛矿型二氧化钛。它是由钛铁矿用硫酸分解和除杂经水解制取的。相对密度3.84,折射率2.55,平均粒度约0.3～0.35μm,白度约98度。二氧化钛适用于字典纸、薄画报纸、证券纸、钞票纸等高级纸。由于二氧化钛价格较高(每吨约8500元),所以提高二氧化钛的留着率就显得非常重要。在抄纸时,添加10％的二氧化钛,留着率仅有40％。对于纤维长、吸附能力差的棉浆,二氧化钛的存留率则更低。我厂经过多年实践、摸索,二氧化钛添加量在5％以下时,棉浆抄纸中填料留着率可达到66％,采用气浮浮渣回用,添加助留剂后,二氧化钛的留着     

电感耦合等离子体原子发射光谱法测定多金属矿中二氧化硅

多金属矿具有重要的研究和开采价值,测定其中的二氧化硅含量,对于综合判断多金属矿石的化学组成、矿物组成具有重要意义,现有测定方法不能满足快速准确分析多金属矿石中二氧化硅的需求。实验称取0.100 0 g样品于银坩埚中,加1.0 g氢氧化钠,于马弗炉中从室温逐步升温至640 ℃熔融,在塑料烧杯中经水浸取后,将浸取液倒入热的盐酸(1+1)中,并不断搅拌,再将溶液加热至沸,冷却后定容于250 mL容量瓶中,最终控制溶液为5%盐酸酸度。选择Si 251.611 nm作为分析线,建立了使用电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)测定多金属矿石中二氧化硅的方法。结果表明,二氧化硅的质量浓度在1.00～50.00 μg/mL范围内与其发射强度呈线性关系,线性相关系数为0.999 8;方法检出限为0.01%(质量分数,下同),定量限为0.04%。按照实验方法测定多金属矿石样品中二氧化硅,结果的相对标准偏差(RSD,n=6)小于3%;测定多金属矿有证标准物质中二氧化硅,其相对误差绝对值小于3.1%,测定值与推荐值相吻合。