在糖化酶发酵生产中低温保存黑曲霉菌

在糖化酶生产过程中,为了防止正常生产中黑曲霉菌种性能的变化,对菌种的一级种母进行甘油冷冻保存,在-120℃的条件下分别保存30、60、90d,然后直接接入种母培养基,待成熟后接入种子罐,投入50t发酵罐工业生产,150h左右发酵结束。产酶单位与原工艺条件相一致。     

黑曲霉葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的表达及其高效发酵研究

葡萄糖氧化酶是一类能催化β-D-葡萄糖生成葡萄糖酸-δ-内酯的酶类,在食品、药品以及生物传感器等领域具有广泛的应用前景。从黑曲霉中克隆出葡萄糖氧化酶编码序列,在毕赤酵母中实现了组成型和诱导型表达并分析了其酶学性质和发酵条件。结果表明:黑曲霉葡萄糖氧化酶的编码基因长度为1 818 bp,编码605个氨基酸,具有21个氨基酸组成的信号肽。毕赤酵母组成型表达葡萄糖氧化酶的发酵上清液中葡萄糖氧化酶的酶活可达1.2 U/m L,利用镍离子亲和层析纯化后得到了分子质量约为100 kDa的葡萄糖氧化酶。利用糖苷内切酶H(Endo H)对葡萄糖氧化酶去糖基化后,其分子质量约为70 kDa,与推测的分子质量相近。对黑曲霉葡萄糖氧化酶的酶学性质研究表明,该酶的最适反应pH 6.0,最适反应温度35℃,比活力60.9 U/mg。为了进一步提高葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的表达量,构建了诱导型表达的毕赤酵母菌株并通过G418抗生素筛选获得了高效表达菌株。对该菌株进行高密度发酵(湿菌体200 g/L),甲醇添加量为2.5%,发酵至第7天时葡萄糖氧化酶发酵量可达133 U/m L,蛋白表达量约1.9 g/L。     

纤维素酶的研制及在动物饲料中的应用

采用筛选出的黑曲霉高产株的菌种,通过固态浅层变温发酵工艺生产出高活力纤维素酶,并介绍该酶在猪、奶牛饲料中的应用效果.     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶的研究进展

系统介绍了近年来黑曲霉β-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.2)的酶解特征、酶学性质、催化机制、活性中心、生物学功能及应用技术等方面的研究进展,并展望了其应用前景。     

紫外诱变柠檬酸生产菌黑曲霉的选育

初步研究了柠檬酸生产菌黑曲霉产柠檬酸的影响因素和培养条件,通过紫外诱变考察了出发菌株的受诱变性,统计了紫外诱变黑曲霉引起的生物学效应,在紫外诱变过程中筛选到一株稳定高产菌株10min-3,产酸增加了5.33%,可作为进一步诱变筛选的出发菌株.     

黑曲霉bgl基因在毕赤酵母中的表达研究

为构建具有分泌黑曲霉β-葡萄糖苷酶活力的酵母工程菌,探讨β-葡萄糖苷酶基因(bgl基因)在酵母菌中的表达情况.克隆了黑曲霉bgl基因的cDNA片段,利用质粒pPICZαA构建了该基因的酵母表达载体,经线性化后采用电穿孔法转入毕赤酵母菌中.以甲醇为诱导物进行诱导培养,检测结果表明黑曲霉bgl基因已成功转入酵母菌中并可正常表达,重组蛋白具有β-葡萄糖苷酶水解活性,在诱导培养72 h后,发酵液的酶活力可达到0.78 U/mL.     

基于黑曲霉固态发酵的绿豆皮降解及理化特性提升机理

本试验研究了黑曲霉固态发酵对绿豆皮特性的影响,并对降解机理进行探究,结果表明黑曲霉固态发酵能有效提升绿豆皮制粉特性和功能特性,所得绿豆皮粉体积平均径减小8.53倍,比表面积增大32.46倍。阳离子交换能力、胆酸钠吸附能力及葡萄糖吸附能力均有明显提升,依次提升1.11倍、1.18倍和1.17倍。黑曲霉对绿豆皮的降解,先降解木质素与半纤维素,再降解纤维素。主要通过破坏纤维素、半纤维素及木质素的化学键,降解长链结构为短链结构,破坏结晶区结构,降低相对结晶度,进而破坏绿豆皮结构,使其变得疏松多孔,让绿豆皮易被粉碎为粒径更小、比表面积更大的粉体,具有更好的物质交换效率,提升绿豆皮的理化特性。     

黑曲霉对含铅废水的生物吸附研究

研究黑曲霉真菌对污染废水中Pb^2＋的吸附．研究铅离子质量浓度、pH值、温度、灭菌与不灭菌以及重金属离子存在时对铅去除率的影响．结果表明：在实验条件下,Pb^2＋的最佳吸附质量分数是120mg／L,最适宜pH值为6．0,最佳温度为25℃．在20min取样时不灭菌对模拟废水中Pb^2＋的去除没有影响;20h时取样则由于环境中微生物与黑曲霉的竞争与协同作用使不灭菌的情况对铅的吸附明显好于灭菌的情况;干扰离子Hg^2＋、Cu^2＋、Zn^2＋的存在对铅的吸附无显著影响,并且在同一质量浓度情况下,这3种干扰离子的去除率大小为Zn^2＋〉Cu^2＋〉Hg^2＋．     

黑曲霉产木聚糖酶的特性

研究了木聚糖酶产生菌黑曲霉(A．niger)238的产酶特性和麸曲的浸提条件。并对其浸提酶液进行浓缩．结果表明，菌株黑曲霉(A．niger)238产木聚糖酶受诱导物的影响，发酵时间在68～72h期间达到产酶高峰，酶活力为286U／mL．最佳氮源为(NH4)2SO4，装料量为每瓶10g，接种量为每瓶0．3mL．其发酵麸曲用固液比为1：5的2g／dL CaCl2溶液，30℃浸提1．5h；浸提液采用25℃，40kPa，冷却水温度18℃条件超滤浓缩可获得90％以上回收率．     

黑曲霉植酸酶的纯化及性质研究

对黑曲霉液态发酵植酸酶的纯化及其性质进行了初步探讨．采用葡聚糖凝胶过滤及纤维素离子交换层析对粗酶液进行纯化，电泳显示为单一谱带，该酶的相对分子质量为63000，研究显示其性质为：37℃的条件下以植酸钠为底物的米氏常数为0．31mmol／L，该酶最适pH为5．5，最适作用温度为55℃，研究了金属离子对植酸酶活力的影响．