米黑根毛霉脂肪酶基因的酵母重组表达和Kex2位点改造

米黑根毛霉脂肪酶(RML)具有较高的合成活性、热稳定性、溶剂耐受性以及sn-1,3位置专一性等一系列适合工业化推广的特点。本研究通过密码子优化改造RML编码基因,并将其克隆、转化到毕赤酵母GS115菌株,经诱导发酵156 h,酶活达到3.77 U/mL。为了进一步改善RML脂肪酶的重组表达,通过定点突变的方式去掉潜在的Kex2酶切位点,结果显示:RML突变体表达量均显著低于野生型的RML脂肪酶,表明"-Arg196-Arg197-"序列并不影响RML的重组表达。通过对RML蛋白结构分析,Kex2酶切位点的肽键被包埋在蛋白内部,这表明该位点区域的折叠在进入分泌途径时已基本完成。本研究对异源蛋白的酵母重组表达具有一定参考价值。     

双氧水对米赫根毛霉脂肪酶在米曲霉中重组表达的调控研究

米赫根毛霉脂肪酶RML是具有广泛应用价值的重要微生物脂肪酶。本研究对双氧水调控米曲霉RML转化子ONL1表达脂肪酶进行了研究。荧光定量PCR和SDS-PAGE表明,在转化子培养过程中,维持培养体系中10 mmol/L双氧水2 h,使转化子ONL1的脂肪酶活力提高5倍。在双氧水处理过程中,RML的翻译未受影响,其表达水平的提高源于双氧水对其转录水平的调控。因此,双氧水调控melO启动子控制的外源基因的表达体现在转录水平。由于双氧水易挥发,导致其效果低于延长培养时间。为了在较短培养时间内获得高酶活,应在培养液中持续添加双氧水（10 mmol/L）。基于米曲霉转化子脂肪酶活力的分析和qPCR检测,确定以下策略可用于提高米曲霉中RML的表达水平：脂肪酶RML基因的密码子优化、信号肽序列优化、连续分批培养。     

低钾胁迫下不同烤烟品种根系生长和根毛形态的差异

通过琼脂平板培养技术,研究了K326、NC82、云烟85、RG11、红花大金元等5个烤烟品种低钾胁迫下根系生长和根毛形态的差异.结果表明:低钾胁迫对烟苗地上、地下部生长发育影响显著.不同烤烟品种根系对低钾胁迫的响应能力具有显著性差异,其中苗期的地上部分和根系生物呈表现为RG11受抑制程度最强,其次是红大和云85,NC82和K326最弱;根冠比下降幅度为RG11和云烟85>NC82和K326>红花大金元,以NC82根冠比最为协调;烤烟根系形态受抑制程度大致表现为:云烟85和RG11>K326和红花大金元>NC82;不同烤烟品种根系分布不同,RG11和红花大金元根系集中分布在2 cm以下,K326分布在3 cm以下,云烟85和NC82分布在3～5 cm;根毛密度增加幅度大小依次为NC82>K326>云烟85>红花大金元>RG11.综合分析得出,NC82比其它4个烤烟品种耐低钾胁迫能力高,单株根系总长度和根毛长度可作为烤烟品种的耐低钾胁迫、养分利用效率及抗逆性等的重要指标,采用平板培养技术可较准确、快捷地研究烤烟种质资源的钾营养特性.     

固定化米黑根毛霉脂肪酶的制备工艺优化及其酶学性质北大核心CSCD

以海藻酸钠-羧甲基纤维素钠(CMC)为复合载体,戊二醛为交联剂,探究了包埋-交联法制备固定化米黑根毛霉脂肪酶的最佳工艺条件,并对固定化米黑根毛霉脂肪酶的酶学性质进行分析。结果表明,制备固定化米黑根毛霉脂肪酶的最佳工艺条件为海藻酸钠质量分数2.5%、CMC质量分数1.5%、脂肪酶液浓度800 U/mL、CaCl_(2)质量分数5%、戊二醛质量分数0.03%、交联固定化时间30 min,在此条件下固定化米黑根毛霉脂肪酶的酶活力为245.58 U/g,与游离脂肪酶相比,固定化脂肪酶热稳定性和pH稳定性均有所提高。交联剂戊二醛的添加可以提高固定化脂肪酶的操作稳定性和储存稳定性,在重复使用7次后相对酶活力保持在57.39%,在4℃下存放7周后相对酶活力为61.89%。包埋-交联法制备的固定化米黑根毛霉脂肪酶具有更好的稳定性和适应性,为实现植物油酶法酯化脱酸工业化生产提供参考。     

米黑根毛霉脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达

脂肪酶是主要工业用酶制剂之一,在食品、洗涤剂和制药等领域广泛应用。将编码米黑根毛霉(Rhizo-mucor miehei)脂肪酶RML的基因克隆到pPIC9K载体中,构建了分泌型表达载体pPIC9K-RML,载体经线性化后转化Pichia pastorisGS115,G418梯度筛选获得了分泌表达RML的重组毕赤酵母工程菌,SDS-PAGE分析显示表达的脂肪酶分子量大小与预期一致。初步研究表明,重组脂肪酶最适温度为40℃,最适pH值为8.0,以橄榄油为底物时,发酵上清液酶活最大可达102 U/mL,表明构建的重组毕赤酵母工程菌具有较好的工业化生产潜力。     

用Shag Hair制作风吹的小毛球

Digimation公司出品的Shag　Hair一直是目前唯一解决 3DS　MAX 毛发问题的优秀插件 , 它可以快速产生真实的毛发效果。Shag　Hair不是使用几何模型来制作一根根毛发,它类似于粒子的算法,渲染速度快,功能强大。它有自己的材质和灯光阴影,可以快速地产生毛发的阴影效果。同时又支     

关于提高化肥利用率

1增加植物根毛总量,提高化肥利用率 提高根毛总量,是提高化肥利用率的一个主攻方向,因化学肥料需要依靠植物发达的根毛总量吸收和利用。围绕这个问题我们展开一系列试验。     

采诗脱毛膏用后一根毛都没掉

南昌的曾女士使用脱毛膏后一根毛都脱不下来,她要求商场采诗脱毛膏专柜赔偿,但遭到拒绝。日前,在南昌市东湖区消协的调解下,对方作出了双倍赔偿的处理意见,共赔偿96元钱。4月28日,曾女士前往南昌市叠山路一家商场选购脱毛膏。在导购员的推荐下,她花48元购买了一款采诗脱毛膏。"当时,导购说他     

1 株产甘露聚糖酶嗜热真菌的鉴定、酶学性质表征及转录组学分析

从大曲中筛选出一株产嗜热甘露聚糖酶的嗜热真菌GZFH7，经鉴定该菌为微小根毛霉（Rhizomucor pusillus），接菌至魔芋发酵培养基诱导产生的甘露聚糖酶的最适反应温度为70 ℃。在50～80 ℃范围内可保留50%以上的酶活力。在最适反应温度处理1 h，酶活力基本保持不变。该酶pH 2.0～12.0范围内均具有一定耐受性，其最适反应pH值为5.0。经转录组学测定分析，共有几丁质酶、半乳糖苷酶、甘露糖基转移酶等253 个碳水化合物活性酶基因表达，其中糖基转移酶表达最为丰富，约占41.1%；其次为糖苷水解酶，约占37.5%。微小根毛霉R. pusillus GZFH7是嗜热真菌，其诱导的嗜热甘露聚糖酶热稳定性良好。同菌株GZFH7高效的产碳水化合物活性酶能力使其在酶制剂的开发与应用方面有较大的研究价值。     

米黑根毛霉甘露聚糖酶的定向进化、高效表达与应用

为提高米黑根毛霉甘露聚糖酶（RmMan5A）对魔芋粉的水解效率,利用定向进化技术对该酶进行分子改造,经两轮筛选获得了一个对甘露聚糖酶催化效率显著提升的突变体（RmMan5AM2）。该突变体的最适pH为7.0,最适温度为65 ℃,较野生型甘露聚糖酶提高了10 ℃。该突变体继承了野生型甘露聚糖酶的高比酶活力,对槐豆胶的比酶活力达10 371.4 U/mg。在最适条件下,该突变体对槐豆胶、魔芋粉和瓜尔胶的催化效率分别提高了37.4%、28.9%和34.4%。进一步将该突变体在毕赤酵母中进行高效表达,经过156 h高密度发酵,发酵液胞外酶活力达176 000 U/mL,是目前产甘露聚糖酶的最高水平。利用该突变体水解魔芋粉成功制备魔芋甘露寡糖,产物主要为聚合度2~6的甘露寡糖（相对峰面积>85%）,总得率为88.5%。该突变体具有优良的酶学性质,对魔芋粉的水解效率显著提升,在魔芋甘露寡糖的酶法制备中具有很大的应用潜力。