高效液相色谱法测定不同产地湘莲中荷叶碱、 莲心碱、芦丁的含量

目的建立高效液相色谱法同时测定湘莲中荷叶碱、莲心碱、芦丁的方法。方法在酸性条件下超声提取3种待测组分。色谱条件如下:C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相:甲醇-0.1 mol/L乙酸铵(用乙二胺调节pH值至7.5~8.0)(55:45,V:V);流速:1.0 m L/min;检测波长:275 nm;柱温30℃;进样量10μL。结果荷叶碱、莲心碱、芦丁分别在7.636~152.7μg/mL(r~2=0.9999,n=5)、7.543~150.9μg/mL(r~2=0.9995,n=5)、7.543~150.9μg/mL(r~2=0.9998,n=5)范围内线性关系良好,加标回收率为96.9%~100.5%之间,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为1.1%~1.4%。结论该法同时测定湘莲中荷叶碱、莲心碱、芦丁,简单快速,定量准确,可以为评价不同产地湘莲功效成分提供参考。     

荷叶中荷叶碱及原花青素提取工艺优化

目的：优选荷叶中荷叶碱、原花青素提取工艺。方法：采用正交实验设计,以原花青素、荷叶碱的提取率为指标,考察磷酸浓度、提取时间、料液比等因素对提取率的影响,优选最佳工艺参数。结果：以0．3％（V／V）磷酸为提取溶剂,料液比为1：25（g／L）,提取时间1．5h,提取2次,原花青素的提取率为89．2％,荷叶碱的提取率为69．9％。结论：采用酸水法提取荷叶中荷叶碱、原花青素,具有提取效率高、工艺简便、成本低等特点,适合于工业化大生产应用。     

茶多酚协同荷叶碱的抗氧化活性及其对结肠癌细胞的抑制作用

目的：探讨茶多酚协同荷叶碱的体外抗氧化活性及茶多酚单独对结肠癌细胞Caco-2的毒性作用。方法：采用二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）法、2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis（3-ethylbenzothi azoline-6-sulfonic acid）ammonium salt,ABTS）法检测茶多酚、荷叶碱及二者协同对DPPH自由基、ABTS＋•的清除作用;采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测茶多酚、荷叶碱及二者混合物对Cu2＋/H2O2体系诱导的牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）氧化损伤的保护作用;采用噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法,AO/EB、DAPI荧光染色法检测茶多酚对Caco-2细胞的毒性。结果：茶多酚、荷叶碱具有清除DPPH自由基、ABTS＋•及保护BSA蛋白氧化损伤的作用且呈剂量依赖性,两者之间存在显著的协同效应;1 mg/mL茶多酚作用24 h能显著降低Caco-2细胞活力,诱导Caco-2细胞发生凋亡。结论：茶多酚能有效地清除DPPH自由基、ABTS＋•,抑制蛋白氧化,且与其他活性成分具有协同效应;茶多酚能抑制Caco-2细胞的活力。     

荷叶固体饮料的研制

本研究以荷叶的活性成分(荷叶碱)、L-肉碱、瓜拉那提取物等为主要原料,研制开发一种新型固体饮料.通过实验确定添加基料10%的麦芽糊精增加其溶解性能及改善口感,正交试验表明,每份基料5 g,添加果粉、甜味剂等调味剂的最佳量为黑加仑果粉3g、甜味剂0.2g,柠檬酸0.25g,食盐0.10g.     

HPLC测定荷叶中碱盐的含量

以荷叶为原料,建立一种荷叶碱盐含量的测定方法.运用高效液相色谱法测定,色谱柱为Hypersil ODS2(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-磷酸盐缓冲溶液(0.05%磷酸-0.2%三乙胺-水)(25:75,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为270 nm.结果显示,荷叶碱盐在0.053～0.159 mg/mL(R2=0.999 2)范围内具有良好的线性关系,平均回收率为96.4%,RSD为0.05%.该方法简便、准确,灵敏度高,重复性好,可用于荷叶碱盐成分的含量测定.     

荷叶碱对野生型和突变型囊性纤维化跨膜电导调节因子氯离子通道的激活作用

目的:从天然单体化合物中筛选能够激活囊性纤维化跨膜电导调节因子(CFTR) Cl^-通道转运活性的激活剂。方法:利用稳定表达人CFTR和对卤族元素碘离子高度敏感的荧光绿蛋白突变体EYFP-H148Q 的Fischer 大鼠甲状腺上皮细胞为筛选模型, 测定386 种中药单体化合物对CFTR介导的I^-内流速度的影响。结果:发现生物碱类化合物荷叶碱对野生型和△F508 突变型CFTRCl^-通道具有激活作用, 而对G551D 突变型CFTRCl^-通道无激活作用。荷叶碱对野生型和△F508突变型CFTR Cl^-通道的激活作用具有作用迅速、可逆的特点, 并且依赖于细胞内cAMP 水平。荷叶碱不提高细胞内cAMP 水平, 当CFTR 磷酸化程度达到最大时仍能进一步激活CFTR Cl^-通道激活作用, 表明它可能是通过与CFTR 直接结合而发挥作用的。结论:首次发现荷叶碱对野生型和△F508 突变型CFTR Cl^-通道的激活作用, 该天然化合物将在阐明CFR 活性机制及作为先导化合物开发与CFTR 有关的疾病治疗药物等方面具有重要用途。     

荷叶中荷叶碱的高效液相色谱检测方法及其提取工艺研究

通过正交试验探讨用乙醇回流提取荷叶中荷叶碱的最佳工艺,并建立荷叶碱含量测定的高效液相色谱测定方法。结果表明,用75%的乙醇在90℃温度下按固液比为1∶20(m∶V)回流提取3.5h,荷叶碱回收率高于95%;高效液色谱检测其含量在43.16～258.96μg/mL有很好的线性关系,相关系数达0.999 3,最低检出量为0.103 4μg/mL。说明用该方法提取荷叶碱可行,测定结果稳定、精确。     

荷叶碱的提取分离及其应用

荷叶作为一种天然、安全有效的保健食品和药物,越来越受到人们的青睐.荷叶,在我国的资源十分丰富,主要分布在中国的长江、黄河和珠江三大流域.它因含有生物碱、类黄酮、挥发油、有机酸以及植物固醇等多种功能性成分而具有显著的药食疗功效.荷叶中含有的荷叶碱是一种阿朴啡型生物碱,药理研究表明其为荷叶中主要的降脂成分.最近研究者们多倾向于对荷叶生物碱类化合物的降脂减肥、抗病毒、抑菌、抗惊厥等作用进行研究,但是很少有人研究荷叶碱.目前荷叶碱的需求量不断增加,但是缺少方便有效的分离分析荷叶碱的方法,限制了对荷叶资源进一步的开发和利用.本文综述了荷叶总生物碱的提取、荷叶碱的分离纯化、含量测定和生理活性的研究现状,以期为荷叶碱的深入研究和合理开发利用提供参考.     

荷叶生物活性效应标志成分分析

目的：筛选荷叶生物活性效应标志成分,为荷叶质量及活性评价提供评价指标。方法：采用薄层色谱法分析鉴别、高效液相色谱法测定荷叶的8种黄酮、生物碱成分,进行荷叶抗氧化、抑制脂肪酶的活性效应成分相关性分析;薄层色谱法分离分析荷叶特征色谱斑点,聚类分析法筛选质量标志成分;结果：定量分析标志物荷叶碱为2.48±1.80mg/g,2-羟基-1-甲氧基阿朴啡为0.61±0.33mg/g;荷叶有较强的抗氧化及抑制脂肪酶活性;薄层鉴别标志物为2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、荷叶碱。结论：荷叶中黄酮、生物碱成分含量测定为荷叶多成分的含量测定提供一定技术支持。2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、荷叶碱为薄层鉴别标志物及抗氧化、抑制脂肪酶活性效应的质量评价成分,有助于全面评价荷叶药材质量及生物活性效用。     

应用大孔吸附树脂纯化荷叶生物碱的研究

本文研究了AB-8、D101、HP-20三种大孔吸附树脂对荷叶总生物碱的动态、静态吸附及解吸性能,筛选出一种高吸附、高解吸性能树脂。在此基础上研究了吸附流速、上样液pH值、最大上样量、解吸流速、洗脱液浓度及pH值对提取、纯化荷叶碱的影响。结果表明:D101树脂为提取、纯化荷叶总生物碱的最佳树脂,其最佳纯化条件是:吸附流速2 BV/h,上样液pH值10,最大上样量6 BV;解吸流速2 BV/h,洗脱液为pH值3的70%乙醇溶液。荷叶总生物碱纯化物中荷叶碱的含量为2.26%。为荷叶总生物碱的开发利用打下了基础。