紫外分光光度法研究谷氨酰胺转氨酶交联醇溶蛋白的特性

采用不同浓度谷氨酰胺转氨酶(TG)、不同作用温度和时间,设计三因素三水平的正交试验处理小麦醇溶蛋白,研究醇溶蛋白经TG交联后对紫外吸收的特性.结果表明:对处理后醇溶蛋白的紫外吸收影响大小的因素依次为TG浓度温度时间.TG处理之后醇溶蛋白溶液在255nm处有一个吸收低谷,在275 nm处有一个吸收峰.9个处理组的ζUT值存在差异,但组间差异均未达到显著水平(P0.05).此外,利用蛋白质凝胶电泳和HPLC技术进行分析,也显示出不同处理之间存在一定的差异.     

谷氨酰胺转氨酶介导的荞麦蛋白-花生蛋白交联及其功能特性研究

该文以谷氨酰胺转氨酶（TGase）为交联酶制剂,对荞麦蛋白与花生蛋白进行交联,通过单因素试验对两种蛋白的比例、总蛋白质浓度、TG酶添加量、交联温度、交联时间和pH进行了参数优化,并研究了最佳交联工艺条件下制备得到的交联产物的功能特性。结果表明,荞麦蛋白与花生蛋白的质量比1:1 (g:g)、总蛋白浓度4%、加酶量1.25%、反应温度40℃、反应时间120 min、pH 8.0时的交联反应效果最佳,交联度为63.1%。功能特性测定结果表明,与未交联的蛋白质相比,交联后的蛋白质的持水性、持油性和乳化稳定性有所提高,但乳化性、起泡性和起泡稳定性降低;在pH 3~12范围,交联蛋白质的溶解度逐渐升高,尤其在pI 4.0处,溶解度提高最为显著。     

枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转氨酶的异源表达

以野生型枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增获得带有sD序列及谷氨酸棒状杆菌信号肽AS0949的BTG基因。将其与大肠杆菌-谷氨酸棒状杆菌穿梭表达载体pXMJ19连接,构建重组质粒pXMJ19-Sbtf转化谷氨酸棒状杆菌ATCC13032。经IPTG诱导后该重组茵发酵液具有交联酪蛋白的能力,表明该重组茵能够实现分泌表达。     

微生物谷氨酰胺转氨酶催化细胞色素c赖氨酸残基的定点修饰

研究微生物谷氨酰胺转氨酶(mTG)催化细胞色素c(Cytc)的PEG定点修饰的可行性,并优化修饰条件,研究PEG修饰对Cytc性质的影响。将单甲氧基聚乙二醇氨(mPEG-NH_2)与N-苄氧羰基-谷氨酰胺-甘氨酸(CBZ-QG)共价结合制备含谷氨酰胺残基的甲氧基聚乙二醇衍生物(N-苄氧羰基-谷氨酰胺-甘氨酰-单甲氧基聚乙二醇,CBZ-QG-mPEG);mTG分别催化mPEG-NH_2、CBZQG-mPEG(mTG)修饰Cytc,研究酶法定点修饰Cytc残基的可行性;改变酶的用量、温度、反应时间和p H等反应条件优化谷胺酰胺转氨酶催化修饰Cytc的条件。研究结果表明:(1)mPEG-NH_2不能作为mTG的底物修饰Cytc,甲氧基聚乙二醇氨(mPEG-NH_2)分子上引入谷氨酰胺残基后,在mTG的催化作用下了实现Cytc的PEG修饰,而且基于mTG的底物特异性实现了PEG定点修饰Cytc的赖氨酸(Lys)残基;(2)37℃温度下,p H 8.0的溶液中,1mg/ml的mTG催化修饰反应2h是最佳修饰反应条件;(3)化学法PEG修饰Cytc产物复杂,是多种多点修饰产物的混合物,酶法催化PEG修饰Cytc只产生单一产物;(4)与天然Cytc相比,修饰后Cytc的活力、稳定性都有所提高。提出的谷胺酰胺转胺酶催化修饰法解决了蛋白质Lys残基难以定点修饰的难题,拓展了mTG在蛋白质修饰方面的应用。     

谷氨酰胺转氨酶对馒头品质的影响

为了开发新兴的生物来源性馒头专用面粉品质改良剂,文章研究了谷氨酰胺转氨酶(TG)对馒头制成品感观指标的影响。将高、低筋小麦粉配成五种比例(w/w),再添加0.25%的TG分别制成馒头,并使用行业标准进行了相应的感官质量评价。结果显示,TG的添加能有效改善成品馒头的比容,内外部结构,使其各项感官指标提高。对于不同配比的小麦粉,成品馒头的总体评分提高了0.04%。高、低筋小麦粉配比系列中,5∶5和4∶6的配比显示出了最佳的成品馒头质量,3∶7和2∶8的效果较好,1∶9的效果相对较差。而且在4∶6,3∶7中添加了0.25%的TG的改善效果甚至比5∶5原粉的效果要好,2∶8也可以达到5∶5原粉的效果。试验证明馒头用面粉中添加TG能够改善品质,降低配粉成本。     

乙肝患者当务之“忌”

不少人认为乙肝患者免疫力差，需要补充营养，所以需要种类繁多的饮食。其实。乙肝患者并非营养越多越好，不能想吃什么就吃什么。在临床中，我们经常会碰到这样的病例，如有的肝炎患者因进食了某些食物或补药后，血清丙氯酸转氨酶水平反而明显升高或迟迟不能恢复正常；有的肝病患者本来病情已稳定了，但因进食了一些虾、蟹等海产品后肝病再次复发；有的肝硬化患者因吃了一些鱼肉等高蛋白食物，发生了肝昏迷等。     

利用转氨反应制备L—苯丙氨酸

利用选择性培养基筛选到一株具有高转氨酶活性的大肠杆菌（Escherichia coli），能够高效地把苯丙酮酸和L－天冬氨酸转化成L－苯丙氨酸，利用游离细胞转化苯丙酮酸，反应6h，可生成70g/L L－苯丙氨酸，转化率达90％，利用固定化细胞转化苯丙酮酸，反应8h可生成59.6g/L L－苯丙氨酸，转化率达73％。     

豆腐果甙对小鼠脑谷氨酸脱羧酶和γ-氨基丁酸转氨酶活性的影响

豆腐果甙(Helicid,简称Hel)系中国科学院昆明植物研究所从山龙眼科萝卜树(Heliciaerratica Hook)的果实中提取的一种成分。其化学名为4’-甲酰基苯基-β-D-吡喃阿洛糖甙(4’-formyl-pheny-β-allopyranoside)。Hel有镇静、催眠和一定的抗惊厥作用,亦可使氨基硫脲(TSC)降低的小鼠脑中γ-氨基丁酸(GABA)水平恢复正常。为此,我们用放射性酶测     

黏玉米谷氨酰胺酶的酵母表达及其对乳蛋白的作用

为得到大量的具有生物学功能特性的黏玉米谷氨酰胺酶，首先通过分子生物学技术将前期构建的重组质粒pPIC9K-TGase经双酶切及PCR鉴定正确后，Sac I线性化处理，电转入巴斯德毕赤酵母GS115，用体积分数为1％的甲醇诱导其分泌表达。结果:通过SDS-PAGE电泳分析，与对照组相比，在分子质量约为60 ku处，出现1条特异的蛋白带，即目的蛋白。将酵母表达TGase与0.2%酪蛋白溶液反应2 h，SDS-PAGE电泳显示，酪蛋白被聚合生成不同分子质量的聚合物，表明黏玉米TGase对酪蛋白具有很好的交联作用。将酵母表达的TGase添加到酸奶中，通过扫描电镜观察发现，添加酵母表达的TGase酸奶网络结构变得比较致密。结论:本研究获得的酵母表达的黏玉米谷氨酰胺酶具有交联乳蛋白的生物学活性。     

鲫鱼和青虾GPT的动力学特性及对杀螺药物的敏感性

从鲫鱼和青虾肝脏中分离谷丙转氨酶(GPT),以比活力为指标,L25(56)正交试验与极差分析法研究TGPT酶活力测定的最适条件,测定YNic(氯硝柳胺)和CuSO4(硫酸铜)对GPT活力的影响.正交试验分析鲫鱼GPT活力测定最适条件:酶质量浓度2.0 g/L、底物浓度2.0 μmol/L、反应体系pH值7.0、反应温度30 ℃、反应时间55 min,青虾GPT活力测定最适条件酶质量浓度3.0 g/L、底物浓度0.5 μmol/L、反应体系pH值7.5、反应温度45 ℃和反应时间45 min.Nic和CuSO4对鲫鱼和青虾GPT活力均显示诱导作用,其0.002 g/L时对鲫鱼GPT的诱导率分别为641.01%和61.22%,对青虾的分别为45.99%和67.57%.研究结果表明:2种GPT活力测定条件相差较大,酶质量浓度和底物浓度影响作用最大.鲫鱼和青虾GPT对Nic和CuSO4敏感度高,推定GPT可能是Nic和CuSO4中毒的生化靶点之一.