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为提高Western Blotting结果的可靠性,以蛋白溶出率和凝胶电泳蛋白条带完整性为指标,比较提取液种类、研磨方式、酶抑制剂种类及其体积分数和提取时间对南美白对虾肝胰腺蛋白提取效果的影响。采用优化后的提取方法获得高质量蛋白样品,并采用Western Blotting法分析无水环境胁迫后南美白对虾肝胰腺组织中细胞凋亡信号通路相关蛋白的表达水平。结果表明:RIPA裂解液作为提取溶剂所得的蛋白溶出率高于水提和磷酸盐缓冲液,电动匀浆和液氮研磨所得蛋白条带更完整,4%蛋白酶磷酸酶混合抑制剂能有效抑制肝胰腺内源酶引起的蛋白降解;采用Western Blotting法分析无水保活期间南美白对虾肝胰腺蛋白,发现低温诱导休眠的同时会引起细胞轻微凋亡,且凋亡水平呈应激时间依赖性增加,环境胁迫解除后有所回调。 相似文献
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目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)Daoy细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法体外培养Daoy细胞,用不同浓度的Res(10、20、40、80μmol/L)作用不同时间(24、48和72 h),CCK-8法检测Res对Daoy细胞的增殖抑制率;电镜观察Res对细胞内自噬溶酶体的形成情况;Cathepsin D活性检测试剂盒检测Cathepsin D活性;Western blot法检测Daoy细胞中Beclin 1、LC3、p62和溶酶体相关膜蛋白2(lysosomeassociated membrane proteins 2,LAMP2)的表达及3-甲基腺嘌呤(3-MA)和巴弗洛霉素A1(Bafilomycin A1)对Res作用的影响。结果 Res作用后,Daoy细胞的增殖抑制率随Res浓度的升高及作用时间的延长呈升高趋势;随着Res浓度的升高,Daoy细胞内自噬溶酶体形成数量、Cathepsin D酶活性、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值、Beclin 1、LAMP2蛋白的表达均呈上升趋势,p62蛋白表达下降。3-MA作用后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值、Beclin 1、LAMP2的蛋白表达水平明显下降(P <0. 05),p62的表达水平明显上调(P <0. 05);Bafilomycin A1处理后,Beclin 1、p62及LAMP2表达明显降低(P <0. 05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值明显增高(P <0. 05)。结论 Res可抑制髓母细胞瘤细胞Daoy的增殖,其机制可能与Res促进自噬形成与成熟过程有关。 相似文献
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研究了龙眼核活性脂质的组成及其细胞增殖活性。以龙眼核为原料,经超声辅助提取、氯仿萃取、硅胶柱层析分离后得到富含植物甾醇和神经酰胺的活性脂质组分CEP-2;定性定量分析脂质中的活性成分,并在细胞水平上考察龙眼核活性脂质对人皮肤成纤维细胞(HSF)、人永生化角质形成细胞(Ha CaT)增殖活性的影响。结果表明:CEP-2中主要含有三萜类、神经酰胺类、鞣质及酚类物质,总甾醇含量为518. 26 mg/g,神经酰胺含量为2. 65 mg/g; CEP-2在质量浓度为40μg/m L时,HSF细胞的存活率为105. 28%;在质量浓度为100μg/m L时,对HaCaT细胞表现出明显的细胞增殖活性(p 0. 001),细胞存活率为114. 21%。 相似文献
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以肺细胞A549为模型,研究樟树叶精油对PM2.5所致细胞损伤的拮抗活性。研究结果显示:樟树叶精油1.0 mg/mL以内对A549细胞增殖无影响,0.05~1.00mg/mL樟树叶精油对PM2.5所致的细胞毒性作用有显著拮抗作用(P0.05);樟树叶精油可显著降低染毒细胞中丙二醛(MDA)含量,增加超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化物质(T-AOC)含量(P0.05),表明樟树叶精油可通过抗氧化应激拮抗PM2.5致细胞毒性;樟树叶精油可显著降低染毒细胞中炎性因子TNF-α、IL-6的含量(P0.05),表明樟树叶精油可通过抑制炎症反应拮抗PM2.5致细胞毒性。 相似文献