索拉非尼对不同人肝癌细胞株中B7- H3和B7- H4蛋白表达的影响

【摘要】 目的 研究索拉非尼对不同人肝癌细胞株HepG2、Hep3B、BEL- 7402、BEL- 7404、BEL- 7405、QGY- 7701、 QGY- 7703、SMMC- 7721、MHCC97H、MHCC97L、HCCLM3、HCCLM6中B7- H3和B7- H4蛋白表达的影响。方法 免疫印迹法和溴化噻唑蓝四氮唑（MTT）比色法检测索拉非尼在不同人肝癌细胞株中对B7- H3和B7- H4蛋白表达的影响及索拉非尼对不同人肝癌细胞株的抑制作用。结果 不同人肝癌细胞株中B7- H3和B7- H4蛋白表达较正常人肝细胞（HL- 7702）均显著上调（P＜0.01）。索拉非尼对Hep3B、BEL- 7404、MHCC97H、HCCLM3和HCCLM6肝癌细胞株的细胞毒活性IC50值分别为14.56、9.14、9.46、17.21、9.29 μmol/L。分别以5、10、20 μmol/L剂量索拉非尼处理Hep3B、BEL- 7404、MHCC97H、HCCLM3、HCCLM6后，B7- H3和B7- H4蛋白表达均较对照组显著下调（P＜0.01）。结论 B7- H3和B7- H4蛋白在不同人肝癌细胞株中通常过表达，可影响肿瘤免疫逃逸，可能是未来肝癌防治的一个新靶点。
     

双蛋白营养干预促进肠-肝-脾轴免疫互作

异基因造血干细胞移植及愈后都与免疫系统密切相关。目前研究显示,除了脾、胸腺、骨髓等免疫器官外,小肠、肝脏等组织器官同样在免疫调控中起着重要作用。对肠-肝轴、肝-脾轴等器官在免疫调控上的互作研究,为人们更好地了解疾病发生机制以及研发免疫相关疗法奠定了基础。作者团队前期将双蛋白应用于异基因造血干细胞移植临床营养干预,发现双蛋白能够显著促进免疫重建,缩短平均移植时间,并对其作用机制进行初探。本文综述肝脏、脾脏、小肠参与机体免疫调控及器官间免疫互作研究进展,提出机体存在"肠-肝-脾轴(ILS Axis)"的免疫互作新概念。同时结合当前临床试验和基础研究,分析双蛋白通过调节肠-肝-脾轴促进免疫重建的潜在机制。     

仿刺参卵和体壁多肽的制备及免疫活性

以仿刺参卵和体壁为原料制备多肽,测定其基本营养成分和分子质量分布,并研究其对淋巴细胞增殖作用和小鼠免疫功能的影响。采用生物酶解技术和切向流超滤技术分离和制备仿刺参卵和体壁多肽,磺酰罗丹明B比色分析法测定了多肽质量浓度(10、50、100、500μg/mL)对小鼠淋巴细胞增殖(spleen lymphocyte proliferation,SLP)能力的影响,设定水对照组和多肽低、中、高(日剂量83.3、166.7、500.0 mg/kg)剂量组进行30 d小鼠灌胃实验,检测了小鼠脏器/体质量、迟发型变态反应能力、伴刀豆球蛋白A诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力、抗体生成细胞数、小鼠血清溶血素水平、小鼠碳廓清能力、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力及自然杀伤细胞活力等指标。结果表明,仿刺参卵和体壁1~10 kDa多肽(EP1和BWP1)在500μg/mL时均对SLP具有显著的促进作用,其粗蛋白含量分别为64.74、70.25 g/100 g,氨基酸总量分别为45.69、63.26 g/100 g,分子质量分别分布在130~1 600 Da及130~2 500 Da之间。经口服灌胃给予小鼠不同剂量的多肽30 d,EP1可提高小鼠的细胞免疫功能和单核-巨噬细胞吞噬功能,BWP1可提高小鼠的体液免疫功能和单核-巨噬细胞吞噬功能。结果提示EP1和BWP1均具有增强免疫力的功能,可开发为新的免疫调节产品。     

白玉菇多糖对免疫抑制型小鼠的免疫调节作用

目的:研究白玉菇多糖对免疫抑制型小鼠脾脏、胸腺的免疫调节作用。方法:经超声波辅助热水浸提及Sevage法去蛋白得到白玉菇精多糖(RPHM)。将小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、RPHM低剂量组(30 mg/kg bw/d)、RPHM中剂量组(60 mg/kg bw/d)、RPHM高剂量组(120 mg/kg bw/d),每天同时间段进行灌胃,灌胃15 d,建立环磷酰胺(CPA)免疫抑制型小鼠模型。取小鼠脾脏、胸腺,测定其体重、脏器指数;血清细胞因子、单核-巨噬细胞吞噬能力;外周白细胞、红细胞和血小板计数并观察脾脏、胸腺的形态学。结果:与模型组相比,RPHM中剂量组(60 mg/kg bw/d)、高剂量组(120 mg/kg bw/d)可明显提升免疫抑制型小鼠的毛色、活动情况、身体状况、食欲、体重、脾脏指数和胸腺指数、单核-巨噬细胞吞噬功能、骨髓造血功能等指标;也可在一定程度上提高免疫抑制型小鼠IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α的水平,并改善IL-6的分泌异常情况;还可明显改善免疫抑制型小鼠脾脏、胸腺的病变,改善结构完整度。结论:RPHM对免疫抑制型小鼠的脾脏和胸腺有明显的免疫调节作用。     

胶体金免疫层析法定量检测鱼和虾中苯巴比妥残留

建立了一种快速定量检测水产品鱼和虾中苯巴比妥残留的胶体金免疫层析方法。采用胶体金纳米粒标记苯巴比妥单克隆抗体,研究了胶体金免疫层析条件如标记体系p H值、标记抗体浓度、检测T线包被原浓度、质控C线羊抗鼠Ig G浓度、样品前处理方法等对胶体金灵敏度的影响,并借助胶体金试纸条读数仪进行定量检测。结果表明:方法检出限为0.07 ng/mL,线性范围0.08～0.94ng/m L,裸眼消线值(cut-off值)为10.0 ng/mL。方法特异性良好,与巴比妥、戊巴比妥、异戊巴比妥三种结构类似物交叉反应率小于10%。选择罗非鱼、草鱼、鲈鱼和虾进行添加回收试验,样品回收率在73.50%～114.17%之间,相对标准偏差小于15%,且结果与UPLC-MS/MS法一致。该方法具有准确、灵敏、简便、快速等特点,非常适用于水产品鱼和虾中苯巴比妥残留现场快速筛查。     

榛仁免疫活性肽分离纯化及结构鉴定

以榛仁分离蛋白水解肽经超滤获得的分子质量小于3 kDa的组分为研究对象，采用凝胶色谱及反相高效 液相色谱对其进行分离纯化，并对所得组分进行结构鉴定和验证。结果显示：经Sephadex G-15分离得到的组分B1 能极显著降低小鼠RAW264.7巨噬细胞肿瘤坏死因子和白介素-6水平（P＜0.01）；经质谱解析筛选出的肽段Pro-Glu- Asp-Glu-Phe-Arg（PEDEFR）对细胞无毒性作用，高浓度PEDEFR（＞50 μmol/L）能提高小鼠RAW264.7巨噬细胞吞噬能 力；当浓度达到100.0 μmol/L时，促进脾淋巴细胞增殖率达到44.21%，在伴刀豆蛋白A共同作用下，增殖率达到53.22%。 PEDEFR对小鼠RAW264.7巨噬细胞具有较好的免疫调节能力，本研究为榛仁免疫活性肽的开发提供了理论依据。     

基于高通量测序分析鲜槟榔水提液对于小鼠肠道菌群及免疫指标的影响

通过给予小鼠不同剂量鲜槟榔水提液(fresh areca nut water extract,FANE),记录每组小鼠体重增长、分析其血清细胞因子白介素-1 (interleukin 1,IL-1)、α肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α),免疫球蛋白A(immunoglobin A,IgA)、IgG与IgM水平,并通过高通量测序分析结肠微生物菌群的多样性与丰度变化,以探究槟榔灌胃小鼠免疫指标变化与小鼠肠道微生物菌群结构的关系。结果表明,低剂量FANE可显著提高小鼠IL-1的浓度,并降低其IgA和IgG的水平。高剂量FANE造成了小鼠TNF-α的显著降低以及IL-1浓度的显著增加,减少了血清IgA、IgG并提高了其IgM水平。这说明高剂量FANE可能造成了小鼠免疫功能的紊乱。对于小鼠肠道菌群的Alpha多样性分析显示,低剂量组(A1)与对照组(F)具有较相似的肠道菌群结构与菌群丰度和多样性,而高剂量组(A2)相较其它两组肠道菌群多样性明显较低。具体分析,A2组其门水平上厚壁菌门(Firmicutes)与拟杆菌门(Bacteroidetes)比例明显增加,这可能与食物中能量利用率的改变相关。属水平上阿克曼氏菌(Akkermansia)、Enterorhabdus菌与葡萄球菌(Staphylococcus)的显著增加可能反映了肠道炎症与感染的发生以及Zn的缺乏。此外,该组小鼠的长期腹泻也可能促进了上述结果的出现。这些分析表明,肠道微生物结构的显著变化可能在小鼠免疫指标与功能改变过程中起到重要的作用。     

协同免疫量子粒子群算法求非合作博弈Nash均衡解

考虑n人非合作博弈Nash均衡求解问题。将混合策略意义下的Nash均衡转化为最优化问题;把免疫记忆、自我进化、信息共享机制加入量子粒子群算法,通过概率浓度选择公式来保持种群的多样性,提出协同免疫量子粒子群算法。4个经典的数值算例说明,该算法优于免疫粒子群算法,具有较强的寻优能力和收敛性能。     

不同巴氏杀菌条件下的牛源乳铁蛋白对IEC-6细胞增殖的影响

本研究以大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)为对象,通过体外实验,采用3种不同的巴氏杀菌方式(63℃、30 min,72℃、15 s和85℃、15 s)处理牛源乳铁蛋白,模拟婴儿胃肠道消化环境,利用所得的牛源乳铁蛋白水解液刺激IEC-6细胞,研究乳铁蛋白在巴氏杀菌后的免疫活性。结果表明:巴氏杀菌后的乳铁蛋白水解物仍具有促进肠细胞增殖的免疫学活性,且呈剂量依赖性。流式细胞实验结果证实巴氏杀菌后的牛源乳铁蛋白水解液可提高IEC-6细胞在G2/M期和S期的比例,并降低细胞凋亡率。反转录实时荧光定量聚合酶链式反应检测结果表明,牛源乳铁蛋白水解液提高cyclin B1、CDK1和cyclin E1的表达水平,降低p21的表达水平。综上可知,巴氏杀菌不能完全使乳铁蛋白免疫基团失活。两种巴氏杀菌方法(72℃、15 s和85℃、15 s),尤其是85℃、15 s处理,在保证食品安全的同时可最大限度地保留乳铁蛋白的免疫活性。3种巴氏杀菌后的乳铁蛋白水解液促进肠道免疫的最佳质量浓度为0.1 mg/mL。