荧光标记的米糠多糖及其细胞摄入研究

多糖是一类具有良好生物活性的天然大分子物质,但其结构中缺少易于检测的发光基团,给其研究带来诸多不便。为解决这一问题,试验尝试制备荧光探针标记的米糠多糖,并进一步探究其细胞摄入和安全性。利用米糠多糖还原性末端与罗丹明B活泼的氨基反应制备米糠多糖-罗丹明B化合物(Rice Bran Polysaccharide-Rhodamine B,RBP-Rh B);利用米糠多糖还原性末端与酪胺上的氨基共价偶联,通过氨基与异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)发生亲核反应,得到米糠多糖-FITC化合物(Rice Bran Polysaccharide-Fluorescein isothiocyanate,RBP-FITC)。对两种样品分别进行红外光谱、紫外光谱和荧光光谱表征,结果表明米糠多糖成功标记上荧光探针;对RBP-Rh B和RBP-FITC的荧光取代度的测定中,紫外分光光度法测定的荧光取代度分别为0.7%和0.2%,荧光分光光度法测定的荧光取代度分别为1.0%和0.3%;同时试验通过荧光显微镜和MTT法分别研究了荧光标记多糖的细胞摄入和细胞毒性,结果表明标记后的多糖可被细胞有效摄入且细胞毒性低。