金黄色葡萄球菌肠毒素P双抗夹心酶联免疫检测方法的建立

本研究目的是建立一种快速检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素SEP的双抗夹心酶联免疫方法。通过对单克隆抗体和抗血清质量浓度、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔Ig G(Ig G/HRP)最佳稀释度、不同种类包被缓冲液、封闭时间、抗原包被时间、Ig G/HRP作用时间以及四甲基联苯胺(TMB)显色时间等条件进行优化;并采用灵敏度、批内和批间变异和加标回收率等对方法进行评价。结果表明:该方法中抗SEP单克隆抗体的最佳稀释质量浓度为3.28μg/m L,抗SEI兔血清的质量浓度为3.14μg/m L,酶标二抗稀释度1:3000,1×磷酸缓冲盐溶液(pH 7.4)为最佳包被缓冲液,封闭时间为1 h,抗原孵育时间为90 min,酶标二抗反应时间为30 min,TMB显色时间15 min。该方法回归方程为y=0.0313x+0.0262,R2=0.9946。灵敏度为1.80μg/m L,精密度批内变异低于6%,批间变异低于15%,对LB肉汤、牛肉糜和熟米饭回收率达90%以上。