| 蜂毒肽在大肠杆菌中的高效融合表达与纯化 |
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| 引用本文： | 周丽仙,张荣珍,李利宏,徐岩. 蜂毒肽在大肠杆菌中的高效融合表达与纯化[J]. 食品与生物技术学报, 2020, 39(8): 26-33 |
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| 作者姓名： | 周丽仙 张荣珍 李利宏 徐岩 |
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| 作者单位： | 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122; 江南大学 工业微生物教育部重点实验室，江苏 无锡 214122 |
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| 摘 要： | ![]()
生物法制备蜂毒肽是实现大量制备蜂毒肽的关键技术。为实现蜂毒肽的高效表达，通过化学法合成含信号肽、前导肽和成熟肽的蜂毒肽基因promet和蜂毒肽成熟肽基因met，与麦芽糖结合蛋白基因mbp连接，克隆到载体pET15-b，构建重组质粒pET-MBP-MET和pET-MBP-proMET。重组质粒转化大肠杆菌Escherichia coli BL21（DE3），以0.1 mmol/L IPTG进行诱导，30 ℃下过夜诱导，融合蛋白MBP-MET、MBP-proMET在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达。两种目标蛋白质经Ni柱和Dextrin Sepharose HP两步亲和纯化，得到了纯度达90%以上的融合蛋白MBP-MET、MBP-proMET，培养1 L大肠杆菌菌液能制备约20 mg纯蛋白质。通过牛津杯抑菌实验发现，MBP-MET、MBP-proMET能明显抑制细菌生长，产生明显的抑菌圈，MBP-MET和MBP-proMET最低抑菌浓度（MIC）分别为100 μg/mL和140 μg/mL。本研究首次实现了蜂毒肽的高效表达，并进行了抑菌功能验证，为生物法制备蜂毒肽提供了高效、安全的合成途径。
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| 关 键 词： | 蜂毒肽；大肠杆菌；麦芽糖结合蛋白；高效表达；纯化；抑菌 |
High-Efficiency Fusion Expression of Melittin in Escherichia coli and Its Purification |
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| ZHOU Lixian,ZHANG Rongzhen,LI Lihong,XU Yan. High-Efficiency Fusion Expression of Melittin in Escherichia coli and Its Purification[J]. Journal of Food Science and Biotechnology, 2020, 39(8): 26-33 |
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| Authors: | ZHOU Lixian ZHANG Rongzhen LI Lihong XU Yan |
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| Affiliation: | School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China; Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, Jiangnan University, Wuxi 214122, China |
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| Abstract: | ![]()
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