| cA-GFP融合蛋白在大肠杆菌中的高效功能性表达 |
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| 引用本文： | 苏艳芳,杨晶,王蒙,吴少敏,马毅,李杉,王菊芳.cA-GFP融合蛋白在大肠杆菌中的高效功能性表达[J].现代食品科技,2015,31(12):128-133. |
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| 作者姓名： | 苏艳芳 杨晶 王蒙 吴少敏 马毅 李杉 王菊芳 |
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| 作者单位： | （华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006）,（华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006）,（华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006）,（华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006）,（华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006）,（华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006）,（华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006） |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（21306055）；高等学校博士学科点专项科研基金（20130172120041）；广东省自然科学基金资助项目（2014A030313261） |
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| 摘 要： | 为了实现乳酸乳球菌锚定蛋白cA在大肠杆菌中可溶表达以及直观检测其生物学活性,以乳酸乳球菌MG1363为模板,扩增N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶AcmA基因,将其C末端序列与GFP基因融合,连接至大肠杆菌表达载体pET28a,构建重组质粒pET28a-cA-GFP,转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),通过低温诱导表达重组蛋白cA-GFP。工程菌超声破碎后的上清液与经热酸处理的乳酸乳球菌常温孵育,经SDS-PAGE和荧光显微镜检测。结果表明,工程菌可以表达分子量约53ku的目的融合蛋白质,与预期大小相符。cA-GFP通过锚定蛋白cA的引导回向锚定,成功将GFP展示在乳酸乳球菌表面,目的蛋白cA-GFP在乳酸乳球菌表面展示量为121mg/g干重菌体。GFP锚定至乳酸乳球菌后于4℃保存,连续6d测定其荧光强度,荧光强度仍可达82.2%,证明其稳定性较好。成功获得了具有生物学功能的cA-GFP可溶性蛋白,为进一步展示功能性外源蛋白奠定了坚实的基础。
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| 关 键 词： | 乳酸乳球菌 锚定蛋白 绿色荧光蛋白 回向锚定 |
| 收稿时间： | 2015/3/13 0:00:00 |
Efficient and Functional Expression of cA-GFP Fusion Protein in Escherichia coli |
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| SU Yan-fang,YANG Jing,WANG Meng,WU Shao-min,MA Yi,LI Shan and WANG Ju-fang.Efficient and Functional Expression of cA-GFP Fusion Protein in Escherichia coli[J].Modern Food Science & Technology,2015,31(12):128-133. |
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| Authors: | SU Yan-fang YANG Jing WANG Meng WU Shao-min MA Yi LI Shan and WANG Ju-fang |
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| Affiliation: | (School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China),(School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China),(School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China),(School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China),(School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China),(School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China) and (School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Lactococcus lactis anchoring protein green fluorescent protein inverse docking |
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