| 埃可病毒6型表面特异性抗原VP1的原核表达及其多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 李素梅,齐永,潘英,李素芹,李佳萌,徐亭亭,陈晨,王新国,徐艺菲,李越希.埃可病毒6型表面特异性抗原VP1的原核表达及其多克隆抗体的制备[J].粉末涂料与涂装,2016(4):393-398. |
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| 作者姓名： | 李素梅 齐永 潘英 李素芹 李佳萌 徐亭亭 陈晨 王新国 徐艺菲 李越希 |
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| 作者单位： | 南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系;南京军区军事医学研究所;中国药科大学生命科学与技术学院 |
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| 基金项目： | 国家传染病重大专项(2013ZX10004804-003) |
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| 摘 要： | 目的原核表达埃可病毒6型表面特异性蛋白VP1,并制备其多克隆抗体。方法筛选VP1蛋白氨基酸序列中抗原性强的片段,优化基因序列,分别构建重组表达质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1。将经双酶切及测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行15%SDS-PAGE鉴定。将融合蛋白VP1-GST及VP1-His分别用Glutathione resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化。以纯化后的VP1-His融合蛋白作为免疫原免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,以VP1-GST融合蛋白为检测抗原,间接ELISA法检测血清抗体效价,Western blot法检测血清抗体特异性。结果经双酶切及测序鉴定证明,重组质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1构建正确。VP1-GST和VP1-His融合蛋白的相对分子质量分别为38 000和19 000,两种融合蛋白分别以可溶性蛋白和包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的60%和30%,纯化后的纯度均90%。兔抗VP1血清效价为1∶320 000,可与融合蛋白VP1-GST和VP1-His发生特异性结合。结论成功原核表达了融合蛋白VP1-His和VP1-GST,且VP1-His具有良好的免疫原性,其制备的多克隆抗体的特异性较好,为埃可病毒快速检测技术的建立奠定了基础。
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| 关 键 词： | 埃可病毒6型 VP1蛋白 原核细胞 基因表达 多克隆抗体 |
Prokaryotic expression of surface specific antigen of echovirus 6and preparation of its polyclonal antibodies |
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| LI Su-mei;QI Yong;PAN Ying;LI Su-qin;LI Jia-meng;XU Ting-ting;CHEN Chen;WANG Xin-guo;XU Yi-fei;LI Yue-xi.Prokaryotic expression of surface specific antigen of echovirus 6and preparation of its polyclonal antibodies[J].Chinese Journal of Biologicals,2016(4):393-398. |
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| Authors: | LI Su-mei;QI Yong;PAN Ying;LI Su-qin;LI Jia-meng;XU Ting-ting;CHEN Chen;WANG Xin-guo;XU Yi-fei;LI Yue-xi |
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| Affiliation: | LI Su-mei;QI Yong;PAN Ying;LI Su-qin;LI Jia-meng;XU Ting-ting;CHEN Chen;WANG Xin-guo;XU Yi-fei;LI Yue-xi;Department of Biochemistry and Molecular Biology, School of Basic Medicine, Nanjing Medical University; |
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