| 发菜中糖基转移酶基因的克隆及原核表达 |
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| 引用本文： | 陈雪峰,蔡国强,范华,刘欢.发菜中糖基转移酶基因的克隆及原核表达[J].西北轻工业学院学报,2018(1). |
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| 作者姓名： | 陈雪峰 蔡国强 范华 刘欢 |
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| 作者单位： | 陕西科技大学食品与生物工程学院; |
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| 摘 要： | 发菜(Nostoc flagelliforme)是一种陆生蓝藻,前期转录组测序发现糖基转移酶基因转录水平较正常上调2.29倍.以发菜基因组为模板克隆糖基转移酶基因,获得长度为1 290bp的核酸序列.通过生物信息学分析表明,通过生物信息学分析表明,该基因具有较高保守性,蛋白质二级结构主要构成方式为随机卷曲和α螺旋,是亲水性蛋白,酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸磷酸化位点个数分别为2、9、18,蛋白质分子量为47.54kDa,等电点为9.33.正负电荷氨基酸残基数分别为61和51.随后,将该基因插入质粒pET-28a中成功构建重组表达质粒,然后转化至BL21大肠杆菌感受态中进行原核表达.在OD值为0.8时,用1mM IPTG在16℃下诱导表达20h后,获得预期大小重组蛋白(47.54kDa).研究首次成功克隆得到发菜糖基转移酶基因,并构建重组质粒于大肠杆菌中高效表达,实验结果为进一步研究发菜多糖代谢分子调控机制奠定了基础,也为今后糖基转移酶基因工程菌株的构建提供理论依据.
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