| LC-1 ScFv偶联GFP基因的构建及表达 |
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| 引用本文： | 龚兴国,于红,徐飞虎,谭皓思.LC-1 ScFv偶联GFP基因的构建及表达[J].浙江大学学报(自然科学版 ),2005,39(5):751-755. |
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| 作者姓名： | 龚兴国 于红 徐飞虎 谭皓思 |
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| 作者单位： | 浙江大学 生命科学学院，生物大分子与酶工程研究所，浙江 杭州 310027 |
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| 摘 要： | 从具有高效蛋白表达及活力的抗肺癌杂交瘤单克隆细胞株（LC-1）抽提总RNA，反转录成cDNA。根据肿瘤单链抗体（ScFv）基因设计引物，用多聚酶链式反应（PCR）克隆出抗体的重链和轻链基因，并通过重叠延伸PCR法将重链基因与修饰后的轻链基因连接为单链抗体基因。改造后的ScFv与绿色荧光蛋白（GFP）基因连接，构建表达质粒ProGFP-ScFv，随后转化大肠杆菌JM109，用诱导剂IPTG进行诱导表达。表达产物采用Ni-NTA树脂进行纯化，进行SDS-PAGE电泳分析其纯度。酶联免疫检测（ELISA）表明该蛋白已具有抗体活性。395 nm激光激发显示绿色荧光，表明目的基因在原核生物中存在表达。
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| 关 键 词： | 绿色荧光蛋白 单链抗体 原核表达系统 |
| 文章编号： | 1008-973X(2005)05-0751-05 |
| 修稿时间： | 2004年5月25日 |
Construction and expression of fusion gene of LC-1 ScFv and GFP |
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| GONG Xing-Guo,YU Hong,XU Fei-hu,TAN Hao-si.Construction and expression of fusion gene of LC-1 ScFv and GFP[J].Journal of Zhejiang University(Engineering Science),2005,39(5):751-755. |
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| Authors: | GONG Xing-Guo YU Hong XU Fei-hu TAN Hao-si |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | green fluorescent protein(GFP) single chain fibroma virus(ScFv) prokaryotic expression system |
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