| 大肠杆菌苹果酸脱氢酶基因mdh的克隆、高效表达及酶学性质 |
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| 引用本文： | 李倩,徐美娟,夏海锋,饶志明.大肠杆菌苹果酸脱氢酶基因mdh的克隆、高效表达及酶学性质[J].食品与生物技术学报,2011,30(2):267-272. |
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| 作者姓名： | 李倩 徐美娟 夏海锋 饶志明 |
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| 作者单位： | 江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214122;江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214122 |
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| 基金项目： | 国家863计划项目，国家自然科学基金，中央高校基本科研业务费专项资金项目 |
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| 摘 要： | 以大肠杆菌基因组DNA为模板,扩增得到苹果酸脱氢酶(mdh)编码基因mdh,构建了重组菌pET-28a-mdh/BL21并成功表达了mdh,大小约36 000。选用Ni柱亲和层析法纯化具有活性的苹果酸脱氢酶(mdh),纯化后比酶活达到112.5 U/mg,纯化倍数达2.62倍,回收率为59%。并对该酶的酶学性质进行了初步研究,其中反应最适pH值为6.0,在pH值2.0~6.0范围内稳定;反应最适温度为37℃,在42℃以下酶的稳定性较好。K+对酶有明显的激活作用,Cu2+对酶有抑制作用,Hg2+和Zn2+对酶有很强的抑制作用。醇类对酶的活力影响不大,丙三醇可显著提高酶的热稳定性。酶动力学参数以草酰乙酸为底物的Km为0.235 mmol/L,Vmax为0.47μmol/(L.min)。
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| 关 键 词： | 大肠杆菌 克隆表达 苹果酸脱氢酶 纯化 酶学性质 |
Cloning,Expression,and Characterization of a Malate Dehydrogenase Gene from Escherichia coli |
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| LI Qian,XU Mei-juan,XIA Hai-feng and RAO Zhi-ming.Cloning,Expression,and Characterization of a Malate Dehydrogenase Gene from Escherichia coli[J].Journal of Food Science and Biotechnology,2011,30(2):267-272. |
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| Authors: | LI Qian XU Mei-juan XIA Hai-feng and RAO Zhi-ming |
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| Affiliation: | 1,2(1.Key Laboratory of Industrial Biotechnology,Ministry of Education,Jiangnan University,Wuxi 214122,China;2.School of Biotechnology,Jiangnan University,Wuxi 214122,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Escherichia coli cloning and expression malate dehydrogenase(MDH) purification enzymatic properties |
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