共表达蛋白质折叠辅助因子对毕赤酵母分泌表达IFNβ-HSA融合蛋白质的影响 |
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引用本文: | 陈凤祥,关波,陈蕴,段作营,金坚,李华钟.共表达蛋白质折叠辅助因子对毕赤酵母分泌表达IFNβ-HSA融合蛋白质的影响[J].食品与生物技术学报,2014,33(12):1246-1250. |
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作者姓名: | 陈凤祥 关波 陈蕴 段作营 金坚 李华钟 |
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作者单位: | 江南大学工业生物技术教育部重点实验室;江南大学药学院 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(30970029);江苏省优势学科建设工程资助项目 |
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摘 要: | 探索共表达蛋白质折叠辅助因子Ero1、PDI和Bi P对毕赤酵母GS115分泌表达融合蛋白质IFNβ-HSA的影响。将构建的蛋白质折叠辅助因子表达载体p GAP-Ero1、p GAP-PDI、p GAPBi P和空载对照线性化后,电击转化重组毕赤酵母GS115/IFNβ-HSA细胞,用含有400μg/m L zeocin的YPD平板筛选阳性转化子,并采用PCR和Western blot法进一步鉴定。阳性转化子进行摇瓶发酵后,采用SDS-PAGE及Western blot法分析共表达Ero1、PDI和Bi P对IFNβ-HSA表达水平的影响。结果表明,Ero1、PDI和Bi P成功地在胞内过量表达,且不影响宿主细胞的正常生长;共表达Ero1和PDI分别使IFNβ-HSA的表达量提高了80%和90%,而共表达Bi P则对IFNβ-HSA的表达水平无明显影响。
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关 键 词: | 蛋白质折叠辅助因子 融合蛋白质IFNβ-HSA 毕赤酵母 内质网氧化还原酶 二硫键异构酶 分子伴侣BiP |
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