| 西维因抗体库的构建及特异性克隆的筛选 |
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| 引用本文： | 王硕,刘昕煜,吴懿娜,杜欣军,朱超,张洁. 西维因抗体库的构建及特异性克隆的筛选[J]. 食品研究与开发, 2012, 33(7): 127-131 |
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| 作者姓名： | 王硕 刘昕煜 吴懿娜 杜欣军 朱超 张洁 |
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| 作者单位： | 食品营养与安全教育部重点实验室,天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津300457 |
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| 摘 要： | 在计算机辅助下,设计并合成西维因半抗原,与载体蛋白KLH连接后免疫Balb/C小鼠,经过5次免疫后,最高效价和特异性抑制率分别达到254 000和26%;提取免疫后小鼠脾脏总RNA,纯化mRNA后反转录获得cDNA,利用设计的兼并引物获得长度约为400 bp的轻链可变区和重链可变区基因片段,重叠延伸后获得长度约为780 bp的单链抗体基因。经过EcoR I和HindⅢ酶切后,连入T7噬菌体臂,构建西维因特异性的抗体库,抗体库原始滴度为1.74×107pfu。以西维因-OVA为配体对抗体库进行淘选,经过4轮淘选后,利用直接ELISA对获得噬菌体克隆进行特异性检测,西维因对克隆A4-7和A4-16的抑制率分别达到54.1%和66.4%。经过序列测定,2个克隆的轻链可变区分别由108和112个氨基酸构成,重链可变区分别由117和112个氨基酸构成。
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| 关 键 词： | 西维因 噬菌体展示 重组抗体 |
Construction of Phage ScFv Library Against Carbaryl and Selection of Specific Phage Clones |
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| WANG Shuo , LIU Xin-yu , WU Yi-na , DU Xin-jun , ZHU Chao , ZHANG Jie. Construction of Phage ScFv Library Against Carbaryl and Selection of Specific Phage Clones[J]. Food Research and Developent, 2012, 33(7): 127-131 |
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| Authors: | WANG Shuo LIU Xin-yu WU Yi-na DU Xin-jun ZHU Chao ZHANG Jie |
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