鲢鱼和青鱼内源性转谷氨酰胺酶纯化及酶学性质比较

目的：探究鲢鱼、青鱼内源性转谷氨酰胺酶（transglutaminase, TGase）的酶学性质差异。方法：采用80% （NH₄）₂SO₄盐析、Q-Sepharose FF和Sephacryl S-200 HR层析法从鲢鱼、青鱼肌肉中分离纯化出鲢鱼TGase（STG）、青鱼TGase（BTG），并对酶的相对分子质量、肽段序列、二级结构、适宜反应条件、热失活动力学等指标进行测定。结果：纯化后的STG和BTG的比酶活分别为14.34，12.67 U/mg，二者具有相近的相对分子质量。二者的肽段序列存在一定差异，其二级结构均以β-折叠为主，但STG的β-折叠含量略高于BTG的。STG和BTG的适宜反应温度均为50 ℃，适宜反应pH分别为8.0，7.5，完全激活两种TGase活性所需的Ca²⁺浓度均为1 mmol/L，DTT可使两种TGase的酶活性增强，而PMSF、NH₄Cl、NEM、EDTA、Cu²⁺、Ba²⁺、Zn²⁺、Mg²⁺则会抑制其酶活。当温度为37~50 ℃时，热处理对STG和BTG的钝化均符合一级指数衰减动力学，二者的动力学参数E_a值相近。结论：STG和BTG的一级结构及二级结构差异明显，但仍具有相似的适宜反应条件和热失活动力学特征。

Purification and comparison of enzymatic properties of endogenous transglutaminase between silver carp and black carp