谷氨酸棒杆菌中基因NCgl2632的敲除和过表达对三种外源蛋白表达的影响 |
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引用本文: | 张琦,刘秀霞,杨艳坤,白仲虎.谷氨酸棒杆菌中基因NCgl2632的敲除和过表达对三种外源蛋白表达的影响[J].食品与发酵工业,2022(14):1-8. |
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作者姓名: | 张琦 刘秀霞 杨艳坤 白仲虎 |
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作者单位: | 1. 江南大学工业生物技术教育部重点实验室;2. 江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室;3. 江南大学生物工程学院 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(21808082;21878124;22078128;21938004); |
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摘 要: | 谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)作为应用日益广泛的蛋白表达宿主菌,其全基因组虽然已经被测序,但是一些影响蛋白表达的关键基因仍未被研究。基因NCgl2632被预测可能是影响谷氨酸棒杆菌能量代谢的关键基因之一。因此该文首先分别构建了NCgl2632敲除菌株、NCgl2632过表达菌株,测定了生长曲线和胞内ATP水平的变化,并用增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, eGFP)和重链抗体可变区蛋白(variable domain of heavy chain antibody, VHH)验证该基因表达水平的变化对外源蛋白表达的影响,发现敲除该基因对外源蛋白表达量提高有利。同时,由于前期工作中发现NCgl0909的敲除表型比较有利于外源蛋白表达水平的提高,因此在其基础上构建了C.g 15647ΔNCgl2632ΔNCgl0909双敲除菌株,并表达VHH蛋白进行了验证。此外,该文还选取了一种有潜力的蛋白human MutT homolog 1(hMTH1)进行了表达验证和活性检测,由于其分子质量较小且较稳定易于...
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关 键 词: | 谷氨酸棒杆菌 NCgl2632 外源蛋白 hMTH1 |
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