γ-谷氨酰转肽酶的酶学性质及其转肽反应机制 |
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引用本文: | 汪前,姚忠,荀志金,徐晓滢,徐虹,韦萍.γ-谷氨酰转肽酶的酶学性质及其转肽反应机制[J].高校化学工程学报,2008,22(2):288-293. |
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作者姓名: | 汪前 姚忠 荀志金 徐晓滢 徐虹 韦萍 |
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作者单位: | 南京工业大学,制药与生命科学学院,江苏,南京,210009 |
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基金项目: | 国家重点基础研究发展计划(973计划)
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江苏省教育厅青蓝工程项目
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南京工业大学国家自然科学基金预研项目 |
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摘 要: | γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,GGT)能专一地催化γ-谷氨酰基的转移,在γ-谷氨酰基类衍生物的合成方面具有重要的应用价值.今利用Bacillus subtilis NX-2发酵生产GGT,上清液中的GGT经硫酸铵沉淀后,以DEAE Sepharose FF和 Source 15 Q 两步离子交换进行纯化.以γ-D-Gln-L-Trp(SCV-07)为目的产物,研究了GGT的基本酶学性质,确定了其最适反应温度为40 ℃,最适Ph值10.0, 供体/受体浓度为5:7,最适反应时间为4 h,产物转化率可高达42%.结合反应进程曲线,分析了GGT的作用机制,并通过实验证实了GGT不仅具有转肽活性,还可催化产物的不可逆水解,这是导致产物回收率下降的关键原因.经测定得到GGT的转肽反应米氏常数(Km)为5.08 mmol·L-1,最大反应速率(rmax)为0.034 mmol·(min·L)-1;对γ-D-Gln-L-Trp的水解反应米氏常数(Km')为2.267 mmol·L-1,最大反应速率(rmax')为0.012 mmol·(min·L)-1.
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关 键 词: | γ-谷氨酰转肽酶 纯化 性质 γ-D-谷氨酰-L-色氨酸 转肽反应机制 |
文章编号: | 1003-9015(2008)02-0288-06 |
修稿时间: | 2007年1月18日 |
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