离子液体双水相体系分离辣木叶凝乳酶

采用C_4mim]Br/K_2HPO_4双水相抽提技术从辣木叶蛋白中分离凝乳酶,研究双水相参数C_4mim]Br浓度、K_2HPO_4浓度、粗酶浓度、体系pH对凝乳酶活力和分离效果的影响,并与传统的硫酸铵三步盐析法相比较。结果表明:1.3 g/mL的C_4mim]Br,2.2 g/mL的K_2HPO_4,粗酶添加量为20 mg/mL,pH7.5可达最佳凝乳酶萃取效果,此条件下辣木叶凝乳酶的酶活性回收率达到85.5%,纯化因子达1.49。与三步盐析法相比,较强的疏水相互作用提高了酶的分离效果,且分离步骤少可有效降低酶活力损失。根据电泳结果,分相后的辣木叶凝乳酶分子量为(55~60)ku存在于上层的富离子液体相,部分杂蛋白的分子量为(25~40)ku保持在富盐底部。