| 理性设计定点突变提高Streptomyces kathirae SC-1酪氨酸酶热稳定性 |
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| 引用本文： | 郭静,饶志明,杨套伟,满在伟,张显,徐美娟,李星.理性设计定点突变提高Streptomyces kathirae SC-1酪氨酸酶热稳定性[J].食品与生物技术学报,2017,36(9):906-911. |
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| 作者姓名： | 郭静 饶志明 杨套伟 满在伟 张显 徐美娟 李星 |
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| 作者单位： | 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122 |
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| 摘 要： | 利用SWISS-MODEL在线服务器以栗色浑圆链霉菌(Streptomyces castaneoglobisporus)酪氨酸酶(PDB登录号:2AHL)为模板对S.kathirae酪氨酸酶的3-D结构进行同源模拟。使用在线预测软件PoPMuSiC-2.1计算酪氨酸酶每个突变氨基酸的去折叠自由能变化(ΔΔG)来辅助设计提高酪氨酸酶的稳定性,利用定点突变构建突变体,并且在大肠杆菌中对野生型酪氨酸酶及突变体进行表达,最终获得了两个热稳定性提高的突变体R95Y、G123W。在此基础上进行复合突变,获得了一个热稳定性显著提高的突变体R95Y/G123W。该突变体在60℃的半衰期提高了2.43倍,最适反应温度由45℃提高到50℃,本研究所用的基于蛋白质结构的理性设计提高稳定性的策略也可以应用于其他工业酶类,显示了良好的应用前景。
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| 关 键 词： | 酪氨酸酶 氢键 定点突变 热稳定性 理性设计 POPMuSiC |
Enhancement of the Thermostability of Streptomyces kathirae SC-1 Tyrosinase by Rational Sign and Empirical Mutation |
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| GUO Jing,RAO Zhiming,YANG Taowei,MAN Zaiwei,ZHANG Xian,XU Meijuan and LI Xing.Enhancement of the Thermostability of Streptomyces kathirae SC-1 Tyrosinase by Rational Sign and Empirical Mutation[J].Journal of Food Science and Biotechnology,2017,36(9):906-911. |
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| Authors: | GUO Jing RAO Zhiming YANG Taowei MAN Zaiwei ZHANG Xian XU Meijuan and LI Xing |
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