| 摘 要： | 目的鉴定重组卡介苗-BE1726D(rBCG-BE1726D)特异性蛋白的表达,并评价其在小鼠体内的免疫原性。方法将冻干的菌株BCG-SSI和rBCG-BE1726D扩大培养后,超滤浓缩收集上清,超声破碎离心后收获菌体,Western blot法进行特异性蛋白检测。用rBCG-BE1726D和BCG-SSI菌株经腹股沟皮下免疫BALB/c小鼠6周后,分离小鼠脾淋巴细胞,ELISPOT及ELISA法检测脾淋巴细胞干扰素γ(interferonγ,IFNγ)的分泌水平;流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞CD4~+和CD8~+ T细胞的比例。结果菌株rBCG-BE1726D中存在Ag85B、ESAT-6、RV2626c蛋白;菌株BCGSSI中仅存在Ag85B蛋白。经Ag85B刺激后,BCG-SSI组和rBCG-BE1726D组产生的细胞斑点数均明显高于PBST对照组(P0.05);经PPD刺激后,rBCG-BE1726D组产生细胞斑点数量显著高于BCG-SSI组和PBST对照组(P0.000 1);各组间ESAT-6、Rv2626c、Rv1733c、RpfD刺激所产生的细胞斑点数差异无统计学意义(P0.05)。经Ag85B刺激后,BCG-SSI组和rBCG-BE1726D组产生IFNγ的水平显著高于PBST对照组(P0.05);经PPD刺激后,rBCG-BE1726D组的IFNγ分泌水平与BCG-SSI组差异无统计学意义(P0.05);各组间ESAT-6、Rv1733c、Rv2626c、RpfD刺激产生的IFNγ分泌水平差异无统计学意义(P0.05)。rBCG-BE1726D组CD4~+、CD8~+细胞总比例及CD4~+ T/CD8~+ T比值明显低于BCG-SSI组和PBST对照组(P0.05),CD8~+ T细胞比例明显高于BCG-SSI组和PBST对照组(P0.05)。结论 rBCG-BE1726D有较强的免疫原性,可明显提高BALB/c小鼠的免疫应答水平,但与BCG-SSI比较,其免疫原性无明显优势,需对疫苗的保护力进行进一步研究。
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