| 基于ELISA克罗诺杆菌单链抗体制备与鉴定 |
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| 引用本文： | 张秀媛,黄智鸿,王丽霞,陈一,赵瑞平.基于ELISA克罗诺杆菌单链抗体制备与鉴定[J].现代食品科技,2015,31(5):169-174. |
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| 作者姓名： | 张秀媛 黄智鸿 王丽霞 陈一 赵瑞平 |
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| 作者单位： | (河北北方学院农林科技学院，河北北方学院食品安全研究中心,河北张家口 075000),(河北北方学院农林科技学院，河北北方学院食品安全研究中心,河北张家口 075000),(河北北方学院农林科技学院，河北北方学院食品安全研究中心,河北张家口 075000),(河北北方学院农林科技学院，河北北方学院食品安全研究中心,河北张家口 075000),(河北北方学院农林科技学院，河北北方学院食品安全研究中心,河北张家口 075000) |
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| 基金项目： | 张家口科技攻关重点资助项目(1311018C-3) |
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| 摘 要： | 利用基因工程技术制备克罗诺杆菌特异性单链抗体(sc Fv)。从克罗诺杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA,利用RT-PCR反转录合成第一链c DNA后再扩增出抗体的重链可变区(VH)和轻链变区(VL)基因片段,采用重叠延伸PCR的方法,用柔性多肽Linker接头(Gly4Ser)3将VH基因和VL基因拼接成sc Fv基因片段,XhoⅠ﹑Eco RⅠ限制性内切酶双酶切sc Fv后克隆到原核表达载体p ET-26b中构建重组质粒sc Fv-pet-26b,挑取阳性克隆提取重组质粒后转入大肠杆菌BL21中进行诱导表达,通过His柱进行亲和层析,最后利用ELISA检测单链抗体的活性。成功构建了表达克罗诺杆菌单链抗体的基因工程菌株,通过SDS-PAGE和ELISA试验结果表明,诱导表达的罗诺杆菌单链抗体分子量约为30 k Da,其能与罗诺杆菌特异性结合,可作为免疫检测罗诺杆菌的候选抗体分子。
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| 关 键 词： | 克罗诺杆菌 scFv ELISA |
| 收稿时间： | 2014/9/14 0:00:00 |
Preparation and Identification of Cronobacter Single-chain Variable Fragment Antibody using ELISA |
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| ZHANG Xiu-yuan,HUANG Zhi-hong,WANG Li-xi,CHEN Yi and ZHAO Rui-ping.Preparation and Identification of Cronobacter Single-chain Variable Fragment Antibody using ELISA[J].Modern Food Science & Technology,2015,31(5):169-174. |
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| Authors: | ZHANG Xiu-yuan HUANG Zhi-hong WANG Li-xi CHEN Yi and ZHAO Rui-ping |
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| Affiliation: | (College of Agriculture and Forestry Science and Technology, Hebei North University; Food Safety Research Centre of Hebei North University, Zhangjiakou 075000, China),(College of Agriculture and Forestry Science and Technology, Hebei North University; Food Safety Research Centre of Hebei North University, Zhangjiakou 075000, China),(College of Agriculture and Forestry Science and Technology, Hebei North University; Food Safety Research Centre of Hebei North University, Zhangjiakou 075000, China),(College of Agriculture and Forestry Science and Technology, Hebei North University; Food Safety Research Centre of Hebei North University, Zhangjiakou 075000, China) and (College of Agriculture and Forestry Science and Technology, Hebei North University; Food Safety Research Centre of Hebei North University, Zhangjiakou 075000, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cronobacter single-chain variable fragment antibody enzyme-linked immunosorbent assay |
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