| 中蜂囊状幼虫病病毒依赖解旋酶扩增检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 李勇飞,马鸣潇,宋英今,李银平.中蜂囊状幼虫病病毒依赖解旋酶扩增检测方法的建立[J].粉末涂料与涂装,2014(2):267-271. |
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| 作者姓名： | 李勇飞 马鸣潇 宋英今 李银平 |
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| 作者单位： | 辽宁医学院实验动物中心;天津市天津医院普通内科;天津大学农业与生物工程学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31372435);辽宁省人力资源和社会保障厅资助(2011921021) |
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| 摘 要： | 目的建立中蜂囊状幼虫病病毒(chinese sacbrood,CSBV)依赖解旋酶扩增(helicase-dependent amplific ation,HDA)检测方法,并对该方法进行优化及验证。方法提取感染CSBV的中蜂囊状幼虫RNA,以其为模板进行HDA,对建立的HDA的引物浓度(原始浓度为50μmol/L,进行10、20、40、80、160、240、320倍稀释)、反应温度(60、65及70℃)及时间(60、90及120 min)进行优化,并对优化的方法进行特异性、敏感性及稳定性验证。经电镜观察、RT-PCR及优化的HDA法对37份临床样品进行检测。结果 HDA最佳引物浓度、反应温度及时间分别为5μmol/L、65℃及90 min;CSBV与健康幼虫、蜜蜂急性麻痹病毒(acute bee paralysis virus,ABPV)、蜜蜂慢性麻痹病毒(chronic bee paralysis virus,CBPV)、黑蜂王台病毒(black queen cell virus,BQCV)和残翅病毒(deformed wing virus,DWV)cDNA均无交叉反应,HDA的最低检出限为10-2ng,检测试剂保存12个月后,仍可扩增出目的条带;37份临床样品中,有6份样品的RT-PCR和HDA结果为阳性,但电镜观察仅有4份为阳性。结论建立了CSBV HDA检测方法,该方法具有较高的敏感性、特异性及稳定性,为检测其他蜂病毒及快速鉴定其他动物病毒提供了参考。
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| 关 键 词： | 中蜂囊状幼虫病病毒 依赖解旋酶扩增 |
Development of helicase-dependent amplification method for detection of Chinese sacbrood virus |
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| LI Yong-fei;MA Ming-xiao;SONG Ying-jin;LI Yin-ping.Development of helicase-dependent amplification method for detection of Chinese sacbrood virus[J].Chinese Journal of Biologicals,2014(2):267-271. |
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| Authors: | LI Yong-fei;MA Ming-xiao;SONG Ying-jin;LI Yin-ping |
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| Affiliation: | LI Yong-fei;MA Ming-xiao;SONG Ying-jin;LI Yin-ping;Department of Laboratory Animal Center,Liaoning Medical University; |
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