蛹虫草免疫调节蛋白分离纯化、结构表征与免疫调节活性研究

目的 探究蛹虫草蛋白质的免疫调节活性和一级结构。方法 过碱溶酸沉法提取蛹虫草蛋白质,并且用阴离子交换层析法和葡聚糖凝胶层析法对其进行分离纯化,获得一种免疫调节效果较好的组分(记为CMP 2b),通过建立小鼠巨噬细胞免疫调节模型对其组分进行活性评价得到活性最佳的组分,通过基质辅助激光解吸飞行时间质谱测得其分子量大小,通过蛋白质谱解析出其蛋白质一级结构。通过小鼠巨噬细胞研究其对巨噬细胞RAW264.7增殖活性、吞噬率、一氧化氮(nitrogen monoxide, NO)分泌量、免疫因子白细胞介素-1β (interleukin-1β, IL-1β)、免疫因子白细胞介素-6 (interleukin-6, IL-6)、干扰素-γ (Interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)释放量等方面。结果 通过阴离子交换色谱和葡聚糖凝胶色谱分离纯化出一种蛹虫草免疫调节蛋白CMP 2b,由蛋白质谱测得它由196个氨基酸组成,分子量为22.460 kDa;通过建立巨噬细胞免疫调节模型,研究得出CMP 2b对巨噬细胞的增殖能力、吞噬能能力有显著提高,细胞增殖率最高达到了空白对照组的152.91±5.55%,吞噬能力提高了23.34%;并且促进巨噬细胞分泌NO、ROS、IL-1β、IL-6、IFN-γ及TNF-α,其中NO分泌水平分别达到了空白对照组的2.31倍,ROS 分泌水平达到阳性对照组 LPS的 82.33%,TNF-α、IL-1β、IFN-γ和IL-6分泌量分别为空白对照组的5.51倍、17.42 倍、4.18倍和26.75 倍,显著增强了巨噬细胞免疫调节能力。