| sCAR-PPAb基因的原核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化 |
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| 引用本文： | 李娜,王双辉,岳学田,张艳红,仰毅,武玉梅,李新,牛娜,李恭楚.sCAR-PPAb基因的原核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化[J].浙江理工大学学报,2010,27(2):318-322. |
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| 作者姓名： | 李娜 王双辉 岳学田 张艳红 仰毅 武玉梅 李新 牛娜 李恭楚 |
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| 作者单位： | 浙江理工大学生命科学学院,杭州,310018 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，浙江省生物医药工程重中之重学科开放基金 |
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| 摘 要： | 为获得腺病毒受体sCAR与掌叶半夏蛋白(PPA)的亚基B(PPAb)的融合蛋白,将PPAb基因克隆入已构建的原核表达载体pQE30-sCAR中,经PCR和测序鉴定正确的重组质粒pQE30-sCAR-PPAb,转化大肠杆菌M15后获得工程菌。该菌株经IPTG诱导后,高效表达出带有组氨酸标签以包涵体形式存在的融合蛋白sCAR-PPAb。包涵体经过尿素变性溶解、PBS稀释复性、Ni离子亲和层析柱纯化,获得目的蛋白。SDS-PAGE及Western blotting分析表明,在42 kD左右有一条明显的特异性蛋白条带。同时细胞实验结果表明融合蛋白sCAR-PPAb能提高Ad-EGFP对Kasumi-1的感染效率。
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| 关 键 词： | PPA sCAR-PPAb融合蛋白 亲和层析 |
Construction of Prokaryotic Expression Vector and Prokaryotic Expression, Purification of sCAR-PPAb |
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| Keywords: | PPA |
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