| 组成型天冬氨酸转氨酶基因工程菌的构建与高效表达 |
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| 作者姓名： | 宫长斌 徐娴 李霜 何冰芳 |
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| 作者单位： | 南京工业大学制药与生命科学学院,江苏,南京,210009;南京工业大学制药与生命科学学院,江苏,南京,210009;南京工业大学制药与生命科学学院,江苏,南京,210009;南京工业大学制药与生命科学学院,江苏,南京,210009 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金
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江苏省高校高新技术产业发展项目 |
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| 摘 要： | 天冬氨酸转氨酶AspAT是苯丙酮酸转氨制备L-苯丙氨酸的关键酶. 本研究将大肠杆菌中天冬氨酸转氨酶基因aspC克隆到3种不同质粒中,构建组成型表达质粒pUC/P-aspC, pSE/P-aspC, pET/P-aspC,并分别转化至6种常用的大肠杆菌宿主中. 通过对18种重组子的生长及产酶情况的分析,比较了各种重组子生长压力、质粒稳定性与表达酶活的关系,并经SDS-PAGE电泳分析AspAT的表达量,筛选出高产AspAT的重组子BL21(pET/P-aspC),以该工程菌发酵液直接作为酶液,以天冬氨酸和苯丙酮酸(20 g/L)为底物,发酵液与底物以1:3的体积比转化生成L-苯丙氨酸16.2 g/L,转化率高达80.1%. 该体系表达无需诱导,转化无需添加辅酶PLP,展现了良好的产业化前景.
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| 关 键 词： | 组成型表达 天冬氨酸转氨酶基因 天冬氨酸转氨酶 L-苯丙氨酸 磷酸吡哆醛 |
| 文章编号： | 1009-606X（2007）03-0574-05 |
| 修稿时间： | 2006-09-21 |
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