| 食品微生物肉葡萄球菌的高效转化技术研究 |
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| 引用本文： | 朱紫纯,顾青,郦萍.食品微生物肉葡萄球菌的高效转化技术研究[J].中国食品学报,2023,23(8):165-174. |
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| 作者姓名： | 朱紫纯 顾青 郦萍 |
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| 作者单位： | 浙江工商大学食品与生物工程学院 浙江省食品微生物技术研究重点实验室 杭州 310018 |
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| 基金项目： | 浙江省自然科学基金杰出青年项目(LR22C 200005)；中国工程院院地合作项目(2019-ZJ-JS-02) |
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| 摘 要： | 肉葡萄球菌是广泛应用于发酵肉制品的食品微生物，然而，该菌在发酵制品中的生长代谢机理目前尚未可知，究其原因与基因工程操作中质粒转化难、无法建立成熟的分子生物学体系密切相关。肉葡萄球菌具有厚且致密的刚性细胞壁和限制性修饰(RM)系统，导致电转化的再现性差、效率低。本试验研究了电击缓冲液、电场强度、质粒质量浓度、复苏培养基以及质粒修饰和感受态细胞的高温热处理对肉葡萄球菌pCA44电转化效率的影响，并进行电转方案优化。结果表明:用10%甘油与0.5 mol/L甘露醇洗涤制备感受态细胞，加入500 ng/100 μL经大肠杆菌DC10B修饰的质粒，56 ℃高温热处理肉葡萄球菌pCA44感受态细胞2 min后，在电场强度10 kV/cm的条件下电击质粒与细胞混合物，且电击结束后立即加入含有0.5 mol/L甘露醇的复苏培养基RGM2，得到的肉葡萄球菌pCA44电转化效率最高，达到6.26×105 CFU/μg，且随机挑取转化子进行PCR验证均是阳性。本研究获得的电转方案显著提高了肉葡萄球菌pCA44电击转化效率，可为其发酵代谢机制解析提供技术支持，并为后续其它含有RM系统屏障的葡萄球菌系菌株提供参考。
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| 关 键 词： | 肉葡萄球菌 电转优化 大肠杆菌DC10B 金黄色葡萄球菌RN4220 高温热处理 限制性修饰 |
| 收稿时间： | 2022/8/25 0:00:00 |
Study on Efficient Transformation Technology of Food Microorganism Staphylococcus carnosus |
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| Zhu Zichun,Gu Qing,Li Ping.Study on Efficient Transformation Technology of Food Microorganism Staphylococcus carnosus[J].Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology,2023,23(8):165-174. |
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| Authors: | Zhu Zichun Gu Qing Li Ping |
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