| RT-qPCR分析拷贝数及mRNA转录水平对表达左聚糖蔗糖酶的影响 |
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| 引用本文： | 陈硕昌,仝秋平,郭晓磊,朱萍,蒙健宗,杨辉.RT-qPCR分析拷贝数及mRNA转录水平对表达左聚糖蔗糖酶的影响[J].中国酿造,2022,41(4):80-86. |
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| 作者姓名： | 陈硕昌 仝秋平 郭晓磊 朱萍 蒙健宗 杨辉 |
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| 作者单位： | （1.广西大学 生命科学与技术学院，广西 南宁 530004；2.亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，广西 南宁 530004； 3.广西微生物与酶工程技术研究中心，广西 南宁 530004） |
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| 基金项目： | 广西自然科学基金（2017GXNSFAA198128）；;南宁市科学研究与技术开发计划（20141015）； |
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| 摘 要： | 采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）技术对重组毕赤酵母基因组中左聚糖蔗糖酶基因（SacB）的拷贝数及信使核糖核酸（mRNA）转录水平进行检测分析，并用3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定菌株不同诱导时间下左聚糖蔗糖酶水解活力。结果表明，在BMMY液体培养基中经甲醇诱导24 h时，样品转录水平皆达到最大值，此时多拷贝菌株转录水平（2.13）为单拷贝菌株（0.42）的5.1倍；左聚糖蔗糖酶活力在甲醇诱导24 h后均随诱导时间不断上升，多拷贝菌株酶活（13.96 U/mL）较单拷贝菌株（5.48 U/mL）提高1.5倍。重组毕赤酵母整合的左聚糖蔗糖酶基因在1～3个拷贝范围内，随着拷贝数增加，多拷贝菌株较单拷贝菌株的mRNA转录水平及相应的蛋白表达量均显著增加（P＜0.05），说明毕赤酵母是表达基因SacB的良好宿主。
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| 关 键 词： | 实时荧光定量聚合酶链式反应 毕赤酵母 左聚糖蔗糖酶 拷贝数 转录水平 |
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