| 醛酮还原酶AKR1C3基因的原核表达及其生物学活性 |
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| 引用本文： | 牛莹莹,刘传志,李艳红,陈元安,杨惠宇,武成,于源华.醛酮还原酶AKR1C3基因的原核表达及其生物学活性[J].粉末涂料与涂装,2015,28(5). |
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| 作者姓名： | 牛莹莹 刘传志 李艳红 陈元安 杨惠宇 武成 于源华 |
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| 作者单位： | 长春理工大学生命科学技术学院,吉林长春,130022 |
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| 摘 要： | 目的原核表达醛酮还原酶AKR1C3基因,并探讨其生物学活性。方法经人工合成醛酮还原酶AKR1C3基因,克隆至质粒p ET-15b中,构建重组表达质粒p ET-15b-AKR1C3,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经亲和层析镍柱纯化。采用荧光分光法检测酶活性,确定AKR1C3的最适底物,并检测金属离子对酶活的影响。用纯化蛋白分别免疫BALB/c小鼠和新西兰大耳白兔,ELISA法检测动物血清中抗体水平,并对免疫后的兔进行血常规和生化检验,对兔和小鼠进行病理学检查。采用MTT法进行细胞毒理试验。结果重组质粒p ET-15b-AKR1C3经双酶切及PCR鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约36 000,可溶性蛋白占菌体总蛋白的27%,纯化后纯度达95%以上。睾丸酮为AKR1C3最适底物,酶活为100.086 U;金属离子Cu2+、K+可提高AKR1C3酶活;小鼠血清中最高效价为5×104,兔血清中最高效价为6.25×104。AKR1C3对动物肝、肾等器官均有损害。AKR1C3对癌细胞生长抑制作用低于正常细胞。结论醛酮还原酶AKR1C3在E.coli BL21(DE3)中成功表达,并获得高纯度、高活性的酶,对细胞生长有抑制作用,对动物肝、肾等器官均有损害,为诊断及治疗多种癌症提供实验依据。
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| 关 键 词： | 醛酮还原酶AKR1C3 原核细胞 基因表达 生物学活性 |
Prokaryotic expression and biological activity of aldehyde and ketone reductase AKR1C3 |
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| NIU Ying-ying,LIU Chuan-zhi,LI Yan-hong,CHEN Yuan-an,YANG Hui-yu,WU Cheng,YU Yuan-hua.Prokaryotic expression and biological activity of aldehyde and ketone reductase AKR1C3[J].Chinese Journal of Biologicals,2015,28(5). |
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| Authors: | NIU Ying-ying LIU Chuan-zhi LI Yan-hong CHEN Yuan-an YANG Hui-yu WU Cheng YU Yuan-hua |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Aldehydes and ketones reductase AKR1C3 Prokaryotic cells Gene expression Biological activity |
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