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| 中蜂囊状幼虫病毒VP1基因的优化表达及其免疫原性分析 | |
| 引用本文： | 张皓淳,宋立先,万红霞,马鸣潇,曲祖乙,费东亮,钟义.中蜂囊状幼虫病毒VP1基因的优化表达及其免疫原性分析[J].粉末涂料与涂装,2015,28(5). |
| 作者姓名： | 张皓淳 宋立先 万红霞 马鸣潇 曲祖乙 费东亮 钟义 |
| 作者单位： | 1. 辽宁医学院畜牧兽医学院,辽宁锦州,121000 2. 山东省庆云县人民医院内科,山东庆云,253700 3. 内蒙古赤峰市翁牛特旗医院,内蒙古赤峰,024500 |
| 摘 要： | 目的原核表达优化的中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)的VP1基因,并分析其免疫原性。方法根据大肠埃希菌密码子偏爱性对野生型CSBV VP1(wt VP1)基因进行优化(opti VP1),将基因wt VP1和opti VP1分别克隆至p GEX-6P-1原核表达系统,构建原核表达质粒p GEX-6P-wt VP1和p GEX-6P-opti VP1,分别转化E.coli BL21,经IPTG诱导表达,并对诱导温度、IPTG终浓度及诱导时间进行优化,诱导蛋白经Western blot鉴定;重组蛋白经GSH-琼脂糖凝胶层析纯化;分别用PBS、纯化的GST标签蛋白、纯化的重组蛋白及CSBV纯化病毒免疫小鼠,经间接ELISA法检验各组小鼠的血清抗体效价。结果优化后的VP1基因序列降低了密码子影响指数,提高了密码子适应指数;质粒p GEX-6P-wt VP1和p GEX-6P-opti VP1经鉴定证明构建正确;最佳诱导表达条件为:IPTG终浓度0.8 mmol/L,30℃,220 r/min诱导8 h;诱导表达蛋白占菌体总蛋白百分比由wt VP1菌株(5.49±0.30)%提高至opti VP1菌株(59.7±0.51)%,纯化后纯度可达0.5 mg/ml;兔抗GST标签抗体及兔抗CSBV血清均与优化后的重组蛋白发生特异性反应;重组蛋白组小鼠二免后可产生较高水平抗体,明显高于PBS组和GST标签蛋白组(P0.05)。结论通过密码子优化实现了CSBV结构基因VP1的高效表达,表达蛋白可诱导小鼠机体产生特异性抗体,具有良好的免疫原性,为探讨CSBV感染的分子发病机制和制备抗CSBV病毒的多克隆抗体奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 中蜂囊状幼虫病毒 VP1结构蛋白 原核表达 免疫原性 |
Expression and immunogenicity of optimized Chinese sacbrood virus VP1 protein |
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| ZHANG Hao-chun,SONG Li-xian,WAN Hong-xia,MA Ming-xiao,QV Zu-yi,FEI Dong-liang,ZHONG Yi.Expression and immunogenicity of optimized Chinese sacbrood virus VP1 protein[J].Chinese Journal of Biologicals,2015,28(5). | |
| Authors: | ZHANG Hao-chun SONG Li-xian WAN Hong-xia MA Ming-xiao QV Zu-yi FEI Dong-liang ZHONG Yi |
| Abstract: | |
| Keywords: | Chinese sacbrood virus (CSBV) VP1 structural protein Prokaryotic expression Immunogenicity |
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