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| 携带Herceptin与MICA胞外结构域融合基因的重组腺病毒的构建及鉴定 | |
| 引用本文： | 金鲁宁,李林芳,钱其军.携带Herceptin与MICA胞外结构域融合基因的重组腺病毒的构建及鉴定[J].浙江理工大学学报,2011,28(1). |
| 作者姓名： | 金鲁宁 李林芳 钱其军 |
| 作者单位： | 1. 浙江理工大学生命科学学院,杭州,310018 2. 第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室,上海,200438 3. 浙江理工大学生命科学学院,杭州,310018;第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室,上海,200438 |
| 基金项目： | 国家新药创制重大专项课题 |
| 摘 要： | 通过构建能表达抗体Herceptin与MICA胞外结构域的融合蛋白的重组腺病毒,为进一步联合NK细胞的治疗研究奠定基础.采用Overlap-PCR的方法获得Herceptin与MICA胞外结构域的融合基因,并将融合基因连接到载体pDC339上.接着再利用酶切及PCR方法鉴定载体及重组病毒基因的正确性,并通过ELISA和Westem Blot检测融合蛋白的表达情况,最后经间接免疫荧光分析(IFA)检测融合蛋白的结合特性.构建的载体酶切后经电泳鉴定证实构建成功,重组病毒DNA的PCR显示病毒携带了Herceptin的轻链基因、重链基因及MICA胞外结构域的基因;ELISA和Western Blot证实重组腺病毒成功地表达出了目的融合蛋白;IFA实验表明融合蛋白能与SK-OV-3细胞表面的Her-2受体特异性地结合.最后成功地构建了能表达具有正常结合特性的抗体Herceptin与MICA胞外结构域的融合蛋白的重组腺病毒,为之后与NK细胞的联合治疗研究奠定基础. |
| 关 键 词： | 腺病毒 |
Construction and Identification of a Recombinant Adenovirus Vector Carrying a Fusion Gene Composed of Heceptin and the ECD of MICA |
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| JIN Lu-ning,LI Lin-fang,QIAN Qi-jun.Construction and Identification of a Recombinant Adenovirus Vector Carrying a Fusion Gene Composed of Heceptin and the ECD of MICA[J].Journal of Zhejiang Sci-tech University,2011,28(1). | |
| Authors: | JIN Lu-ning LI Lin-fang QIAN Qi-jun |
| Affiliation: | JIN Lu-ning1,LI Lin-fang2,QIAN Qi-jun1,2(1.School of Life Sciences,Zhejiang Sci-Tech University,Hangzhou 310018,China,2.Laboratory of Viral and Gene Therapy,Eastern Hepatobiliary Surgical Hospital,Second Military Medical University,Shanghai 200438,China) |
| Abstract: | To construct a recombinant adenovirus which can express a fusion protein composed of Herceptin and the extracellular domain(ECD) of major histocompatibility class I related chain A(MICA).The authors fuse the ECD sequence of gene MICA to the Herceptin through Overlap-PCR,and then connect the fusion gene to the adenovirus vector pDC339.The recombinant vector is identified by restriction enzyme digestion of DNA and PCR.Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) and Western Blot are applied to analyze the fusion ... |
| Keywords: | Herceptin MICA |
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