| 测定含甘油牛血清白蛋白样品Lowry法的优化及验证 |
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| 引用本文： | 王晔,耿其秀,秦亚男,李世玲.测定含甘油牛血清白蛋白样品Lowry法的优化及验证[J].粉末涂料与涂装,2019(4). |
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| 作者姓名： | 王晔 耿其秀 秦亚男 李世玲 |
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| 作者单位： | 成都生物制品研究所有限责任公司细菌性疫苗一室 |
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| 摘 要： | 目的优化《中国药典》三部(2015版)通则50中Lowry法2试验条件,进一步提高检测结果的准确性,并进行方法学验证,为柱纯化组分百日咳疫苗中间品蛋白准确定量提供参考。方法用Lowry法2测定经脱氧胆酸钠-三氯乙酸预处理的不同浓度且含50%甘油的牛血清白蛋白,使福林酚反应在20℃水浴条件下分别静置30、40和50 min,筛选出蛋白含量测定值相对误差最小的反应时间;再在10、20和30℃条件下,筛选出相对误差最小的反应温度。对该方法进行精密度、准确度、专属性验证,并确定线性范围。结果福林酚反应温度为30℃、反应时间为30 min时,测定值的平均相对误差最低,与其他试验条件的差异有统计学意义(P0.05)。在该试验条件下,同一工作日不同试验人员间及同一试验人员不同工作日检测结果的RSD均小于2.00%,重复性检测结果 RSD为0.50%,精密度良好;30、50和70μg/m L蛋白溶液测定值的RSD均小于2.00%,回收率在99%~102%之间,可对蛋白准确定量;含甘油50μg/m L蛋白溶液的回收率及其RSD分别为102%和0.50%;不含甘油对照组回收率和RSD分别为100%和0.82%,专属性良好;在0~140μg/m L标准范围内,检测含甘油样品的测定范围在15~140μg。结论采用Lowry法2测定含高浓度甘油的蛋白样品时,福林酚反应温度、反应时间是影响试验结果的重要因素。30℃条件下反应30 min,可提高测定结果的准确性,符合且更有利于柱纯化组分百日咳疫苗中间品的蛋白定量的要求。
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| 关 键 词： | Lowry法 牛血清白蛋白 定量 甘油 优化 |
Optimization and verification of Lowry method for determination of bovine serum albumin protein samples containing glycerin |
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