重组人源化抗CD52单克隆抗体补体依赖的细胞毒性检测方法的建立及验证

目的建立重组人源化抗CD52单克隆抗体补体依赖的细胞毒性(complement dependent cytotoxicity,CDC)检测方法,并对其进行验证。方法将系列稀释的重组人源化抗CD52单克隆抗体加入已接种表达CD52抗原的人淋巴瘤靶细胞中,再加入人血浆冻干补体后,采用ATP显色法定量检测靶细胞的活细胞数目。对试验条件进行优化,并对方法进行专属性、准确性、精密度、线性验证。结果重组人源化抗CD52单克隆抗体在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程:Y=(A-D)/1+(X/C)B]+D。方法经过优化后,确定人淋巴瘤RAMOS细胞为靶细胞,抗体稀释初浓度为120μg/m L,稀释倍数为1∶1.4。不同浓度的无关抗体均对靶细胞无细胞毒性,方法专属性良好。理论CDC活性为50%、75%、100%、125%、150%的试样测定的相对CDC活性分别为(51.33±4.36)%、(75.80±6.31)%、(97.7±7.45)%、(133.27±10.7)%和(158.77±14.13)%,回收率均在80%~120%范围内,相对CDC活性和回收率的RSD均小于10%,方法准确性良好。将100%相对CDC活性试样重复测定6次,6次测定的相对CDC活性为(101.18±8.90)%,RSD小于10%,样品重复性良好。3个不同日期中同一实验员分别检测5个理论CDC活性为50%、75%、100%、125%、150%的试样的相对CDC活性的RSD均在10%以内,时间精密度良好。同一日期中2名不同实验员分别检测5个理论CDC活性为50%、75%、100%、125%、150%的试样的相对CDC活性的RSD均在10%以内,人员精密度良好。线性方程为y=1.065 6 x-4.026,r2=0.983 7,线性良好。结论成功建立了重组人源化抗CD52单克隆抗体CDC检测方法,该方法具有良好的专属性、准确性、重复性、中间精密度和线性,可作为重组人源化抗CD52单克隆抗体CDC活性的常规检测方法。